MAPK信号通路presentation讲义.pptVIP

内容概要 研究背景 研究思路及核心技术 创新点 展望 内容概要 研究背景 研究思路及核心技术 创新点 内容概要 研究背景 研究思路及核心技术 创新点 展望 2.2.1 构建BACE1 稳转 HEK293 细胞株 2.2.2 突变构 2.2.3 转染 2.2.4 检测 建APP突变基因 真核表达载体构建APP突变基因 真核表达载体 2.2.1 构建BACE1 稳转 HEK293 细胞株 2.2.2 突变构 2.2.3 转染 2.2.4 检测 建APP突变基因 真核表达载体构建APP突变基因 真核表达载体 2.2.1 构建BACE1 稳转 HEK293 细胞株 2.2.2 突变构 2.2.3 转染 2.2.4 检测 建APP突变基因 真核表达载体构建APP突变基因 真核表达载体 APP基因序列 重叠延伸法PCR引入突变位点 pcDNA4 引物设计 2.2.1 构建BACE1 稳转 HEK293 细胞株 2.2.2 突变构 2.2.3 转染 2.2.4 检测 建APP突变基因 真核表达载体构建APP突变基因 真核表达载体 脂质体介导 瞬时转染 2.2.1 构建BACE1 稳转 HEK293 细胞株 2.2.2 突变构 2.2.3 转染 2.2.4 检测 建APP突变基因 真核表达载体构建APP突变基因 真核表达载体 检测APP、C99和Aβ Western Blot 、 ELlSA 、质谱 内容概要 研究背景 研究思路及核心技术 创新点 展望 内容概要 研究背景 研究思路及核心技术 创新点 展望 系统构建疾病相关突变库 背景介绍1-页？图来自哪里？原始数据，自己绘图？ 背景介绍1-页？ 背景介绍1-页？ 王德美 2014.12.17 淀粉样前体蛋白(APP)的突变在 淀粉样多肽（Aβ）形成过程中作用研究 1.1 阿尔茨海默症（Alzheimers disease, AD） 1906年报道1例51岁女性患者，进行性记忆和语言能力丧失及识别能力障碍，病情逐渐恶化、4年半后死亡，病解发现脑萎缩、老年斑和神经原纤维改变。 65-69 70-74 75-79 80-84 85-89 90-94 95-99 年龄 (年) 病理特征：β淀粉样蛋白沉积形成的细胞外老年斑和tau蛋白过度磷酸化形成的神经细胞内神经元纤维缠结。 老年斑 神经元纤维缠结 1.2 淀粉样蛋白级联假说 Amyloid cascade hypothesis neurodegeneration Fomation of brain oligomeric Aβ or deposition of fibrillar Aβ accumulation Amyoid precursor protein(APP) Pathogenesis：increased，altered production or reduced clearance of Aβ hereditary factor environmental factor β- secretase γ- secretase Aβ（observed in the brain of patients with ADAD and SAD） APP 淀粉样前体蛋白 Aβ 淀粉样多肽 β- secretase β分泌酶 γ- secretase γ分泌酶 APP C83 APP水解途径 非淀粉样途径：被α-分泌酶（C83）和γ-分泌酶连续切割 淀粉样途径 ：Aβ的产生，被β-分泌酶（C99）（670Met～671Asp之间） 和γ分泌酶依次切割 APP是一种跨膜蛋白质,在体内各种组织广泛存在,而在脑组织的表达最高。 APP水解途径 β分泌酶水解670Met～671Asp之间的肽键，将APP一分为二，生成670个氨基酸的APP片段和带完整Aβ的跨膜C段。 非淀粉样途径：被α-分泌酶（C83）和γ-分泌酶连续切割 淀粉样途径 ：Aβ的产生，被β-分泌酶（C99）和γ分泌酶依次切割 课题选取的5个APP突变 突变位点 氨基酸残基替换 突变命名 发现时间 673 A→T 冰岛人突变 2012年Nature A→V 2009年Science 682 E→K 2011年 693 E→G 北极人突变 2001年Nature Neuroscience E→Q 荷兰人突变 1990年Science 选取理由：2个早期发现突变E693G和E693Q，剩余3个为近些年发现的突变。对比研究。 app基因碱基序列突变位点 碱基替换 APP蛋白氨基酸序列突变位点 密码子改变 氨基酸替换 密码子名称 2217 G→A 673 GCA→ACA A→T 丙氨酸→苏氨酸 2218