花生、河虾过敏抗体的制备及压电免疫传感同步检测.pdfVIP

摘要 花生、河虾过敏原抗体的制备及压电免疫传感同步检测 学科、专业：医学、营养与食品卫生学 入学时间：2007．9 硕士研究生姓名：宁炜 答辩时间：2009．7 指导教师：钱和教授 授予学位时间： 摘要 花生、河虾属于八大类容易引起过敏的食品，相对其它食品过敏而言，它 们的过敏发生率较高、临床症状更为严重，在公共卫生和食品安全领域倍受人 们的关注。而现有的过敏原检测方法操作繁琐，无法满足快速、简便、在线检 测的要求，因此，研究和建立一种方便、安全和快速的检测方法具有重要意义。 研究主要内容包括花生、河虾过敏原的分离纯化，兔抗花生、河虾多克隆 抗体的制备，探索胶体金是否可以作为一种新型的免疫佐剂；运用自组装的压 电免疫传感器测定花生抗体和河虾抗体的免疫亲和常数，并同时包被两种抗体， 对过敏原分别进行筛检。 花生、河虾蛋白浸液经硫酸铵分级沉淀，等电点沉淀，AKTA蛋白纯化系 统得到纯化，收集后经电泳检验。采用柠檬酸三钠还原法制备得到16nm左右 的胶体金，以新西兰大白兔为模式动物制备抗体，免疫过程设立胶体金为佐剂 和弗氏完全(不完全)佐剂作对照，发现胶体金能够显著提高大白兔体内抗花 生、河虾过敏蛋白的抗体水平，花生与胶体金组的平均效价比弗氏佐剂组提高 了一倍，其IC50为34．28 ng／mL；河虾与胶体金组的平均效价比弗氏佐剂组提高 了25％，其ICs0为43．95 ng／mL。 运用自组装的压电免疫传感器测定得到花生抗体的亲和常数Ka=2．86x107 7 7 10 L／mol，混合抗体对花生抗原的Ka=1．37x10L／mol；河虾抗体的Ka=5．16X 7 L／mol，混合抗体对河虾抗原的Ka=2．57x10L／mol。自组装的压电传感器同时 包被花生和河虾混合抗体，分别加入一系列浓度的花生过敏原及河虾过敏原进 行检测，绘制得到各自的标准曲线和其检测灵敏度。同时进行加标回收实验， 回收率较高，重现性较好，实现了花生、河虾过敏原的同步筛检。 本研究所建立的自组装的压电传感器同时包被花生、河虾两种抗体，实现 了同步对花生、河虾过敏原的检测，快速、方便，具有较好的实用价值。 关键词：花生；河虾；酶联免疫；压电免疫传感器；同步检测 Abstract Abstract Peanutsand arelistedinthelistof common foods． shrimp eight allergic to other and havethe the incidence Compared allergicfoods，peanutsshrimp higher of more andthe severeclinical havebeenconcernedmuchin allergy symptom，and thefieldof healthandfood methodsof public safety．Theexisting allergen