葛根素对3T3-L1前脂肪细胞分化及2型糖尿病胰岛素抵抗的实验研究.pdfVIP

摘要 目的：为更深入研究中药葛根的有效活性成分葛根素对胰岛素抵抗的作用，以设计 此实验，一方面研究葛根素(Pur)对3T3一L1前脂肪细胞增殖、分化的作用；另一方 面，在此基础上研究IR状态下Pur对3T3一Ll脂肪细胞葡萄糖代谢的作用。 umol／L 方法：以3、10、30、100、3005个浓度Pur作用于前3T3一Ll细胞。以MTT 法检测其对细胞增殖的影响，简要步骤：培养基接种3T3一L1前脂肪细胞，当期处于 合适时期(成对数)开始实验，将其接种于96孔板内以适当的条件孵育。待12小时 后用3、10、30、100、300lJm01，／L浓度组Pur的培养液孵育72小时；设立葛根素5 个不同浓度组、1个Contr01组。按一定体积配置MTT培养液，以此液继孵4小时， 弃此液使其干燥，加DMS0摇匀，测光度，计算均数。以油红。染色法检测其对前脂 肪细胞分化过程及成脂的影响，简要步骤：同样是接种，只是接孔不同(此为48孔)； IBMX、1umol／L 用浓度为0．5姗01／L Dex、10mg／LIns的培养基培养48小时。然后 进入下一步。以与上一步相同的时间，取浓度为10mg／LIns的培养基培养。完毕后， 更新成DMEM培养基培养6d，按频率为1次／2d对培养更新，分化为成熟脂肪细胞； 同时，设立五个不同浓度的Pur组、1个对照组的干预实验；待分化结束油红O染色、 观察、拍片、测光度、计算。Dex诱导3T3一Ll细胞造IR模型，简要步骤：对照组用 正常培养基进行培养，剩下每组分别加入lumol／L的地塞米松，培养时间为1天；再 300umol／L 5个浓度的Pur进行实验，检测细胞的葡萄糖消耗量。 渺现笏／)，无显著性差异，则3T3一L1前脂肪细胞增殖没有因Pur浓度的差异受到明 u u 显的影响。开始Pur的浓度为3m01／L、10m01／L时分化成脂的速度不明显；随着葛 根素浓度的升高，当为30u u 细胞分化成脂的速度加快；当为100mol／L时，与Contr01对照组比较，(尸m刃)， 差异性显著；随着Pur浓度的增加3T3一Ll前脂肪细胞分化成脂的速度明显加快。葛根 u 素浓度为3、10m01／L时IR模型3T3一Ll脂肪细胞的葡萄糖代谢不显著。当葛根素浓度 u 为30 H Control比较(尸m洲)有显著性差异，则在Pur浓度为10m01／L以后浓度越高葡萄 糖代谢越明显。即其间有量效关系。 结论：葛根素一方面可以加速3T3一L1前脂肪细胞向脂的分化。另一方面可以提高IR 状态下3T3一L1脂肪细胞的葡萄糖代谢，从而改善IR。 关键词：葛根素；3T3一Ll前脂肪细胞；胰岛素抵抗 i mentaI of i n Pueraron3T3一L1 i and Exper Study preadpocytes i nsuI i nresi stancei n 2di I I type abetesme i tus Abstract i Ve： Astheactive ofa 0bject more ofRadix ingredient in—depthstudy PuerariaeRadixPuerariae the on roleofinsulin inorder