苦参对大肠癌细株HT-29细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响.pdfVIP

中 文 摘 要 苦参对大肠癌细胞株HT-29细胞端粒酶活性及细胞 凋亡的影响 摘 要 目的:本课题通过研究氧化苦参碱 (苦参素)及苦 参碱对大肠癌细胞株 HT29细胞端粒酶活性及细胞凋亡 的影响，从苦参碱能降低瘤株细胞的端粒酶活性，并能 促进瘤株细胞的凋亡角度，综合探讨苦参碱对瘤株细胞 的作用机制。 方法:1.50%抑制浓度 (IC50)测定:采用MTT法 测定不同浓度氧化苦参碱和苦参碱处理HT29细胞 (购 自北京大学医学部分子生物研究室)24h后，于550nm 测吸收值。依据中效方程:fa/fu=(D/Dm)0,两边取对数 即:logfa/fu=mlogD-mlogDm，其中fa为细胞生长抑制 率，fu=l-fa,D为药物浓度，Dm为中效浓度，m为斜率。 计算出中效浓度。2.对比实验:采用中效浓度的氧化苦 参碱和苦参碱作用于正常人白细胞24h,MTT法 (550 nm)测定其OD值。证实中效浓度的氧化苦参碱对正常 人白细胞增殖无抑制作用。3.以人大肠癌HT-29细胞株 为研究对象，观察氧化苦参碱及苦参碱在中效浓度时， 作用24h,48h,72h后，HT-29细胞株的端粒酶活性 变化;通过流式细胞学测定，观察瘤细胞凋亡的变化; 免疫组化检测肿瘤细胞中P53蛋白表达变化。 结果:1.MTT实验证实氧化苦参碱抑制HT一29细 胞增殖的IC50为4869.27ug/ml，苦参碱抑制HT-29细 中文 摘 要 胞增殖的IC50为43.615ug/ml。为便于计算分别采用5000 ug/ml和40ug/ml。数据分析表明:氧化苦参碱及苦参碱 在中效浓度及高浓度能够明显抑制HT-29细胞株增殖活 性，24小时抑制率最高达60%-70%.说明该药对HT-29 细胞株有抑制作用。 2.氧化苦参碱在5000ug/ml时对人的白细胞增殖抑 制率1-0.102/0.11工=0.08，即8%左右。这与文献记载氧化 苦参碱5000ug/ml时抑制人肝细胞率在10%相一致。而在 500u创ml时，反而促进白细胞的增殖。这与文献报道该药 有升白细胞作用一致。实验提示:在该药中效浓度时， 对人体正常细胞增殖抑制作用小，而对肿瘤细胞增殖抑 制作用明显。 3.氧化苦参碱采用10000ug/ml,5000ug/ml, 500ug/ml,苦参碱采用100ug/ml,40ug/ml,4ug/ml分别 作用于指数增长、生长良好的HT-29细胞株。分别作用 24h,48h,72h后收集细胞，检测细胞端粒酶活性。结果 二药物分别处理24h端粒酶活性均数依次为:0.910, 0.906,0.702,0.793,0.662,0.755，与对照组均数0.982 比较差异性无显著性P0.05(P=0.4338);而48h端粒酶活性 均数依次为:0.235,0.504,1.250,0.284,0.428,0.811, 与对照组均数1.136比较差异有显著性P0.01(P=0.0001); 而72h端粒酶活性均数依次为:0.302,0.777,0.326,0.572 (其中10000ug/ml与100ug/ml组细胞数目少，未测)，与 对照组均数1.187比较差异性有显著胜P0.01(P=0.001)。 两药之间比较在中效浓度作用48h,72h端粒酶活性差异 无显著性P0.05(P值分别为0.6303,0.6518)从以上数 中 文 摘 要 据可以看出:氧化苦参碱及苦参碱均对大肠癌细胞株 HT-29细胞端粒酶活性具有抑制作用，且具有时间、剂量 依赖性。 4.流式细胞术检测显示，氧化苦参碱5000ug/ml处 理24h,48h,72h后，HT29细胞数目凋亡百分比分别是 15.31.%，17.99%，26.58% 。苦参碱40ug/ml处理24h, 48h,72h后，HT29细胞数目凋亡百分比分别是0.32%, 11.46%,34.30%。对照组(1%血清培养基)处理24h,48h, 72h后，HT-29细胞数 目凋亡百分比分别是0.85%,1.52%, 2.62%。以上数据提示:随着药物剂量增大、作用时间延长