生殖激素的测定雌节育精要.ppt

第六节 生殖激素的测定 主要内容（六） 一、生物测定法（bioassay） 二、免疫测定法（immunoassay） 三、受体测定法 四、理化测定方法 一、常规生物测定法 生物活性： 某生殖激素按一定比例稀释后 注射到大鼠、小鼠、公鸡等实验动物体内 观察实验动物靶器官对激素的反应 一个生物学单位： 实验动物中产生生物学效应的最低激素用量 如：大白鼠单位、鸡冠单位 生物测定法种类 1．子宫增重反应 雌激素生物学活性测定 未成熟、或摘除卵巢2周后的大鼠或小鼠 每组5~7只，每日皮下注射1ng~20ng标准激素 连续注射7d 第8d取出子宫、剥离其附着组织，称重 标准曲线：子宫重-纵座标、标准激素用量-横座标 待测样本的生物学活性： 待测样子宫重与标准曲线比较 测定FSH、或PMSG生物学活性： 可利用雏鸡为实验动物 观察输卵管的增重 2．阴道涂片检查 ES测定的另一方法 观察ES对阴道上皮的角质化程度 ES处理：每隔12h皮下注射1.5~15ng 连续注射三次 最后一次注射激素第24h开始 隔12h作阴道涂片 检查有无角质化的上皮 阳性反应的百分比与标准剂量反应曲线比较 HCG的生物活性： 25日龄大鼠间隔8h于皮下注射6次 然后按上述方法可检测 3．鸡冠发育反应 雄激素测定：灵敏度可达0.01mg 将待测样本溶解于乙醚 每天在鸡冠上涂搽0.2ml 在第7d后取鸡冠称重 冠重直接与雄激素的剂量成正比 4．卵巢增重反应 25日龄大鼠，每天于腹腔内注射一次 连续3d，第4d（72h）取出卵巢称重 PMSG测定：灵敏度可达2国际单位 FSH的测定: LH或HCG作为协同剂、增强反应 5．排卵试验 未成熟的仓鼠于出现GTH前12h 静脉注射待测样本 18h后取出卵巢和相连的输卵管 计算洗出的卵子数 其数目与GTH的剂量相关 测定FSH、HCG和PMSG： 灵敏度0.25mg、0.1和2 IU 6．抗坏血酸排空反应 假孕（孕酮处理）、或出生后5~9d的大鼠 LH可排除假孕动物黄体中抗坏血酸的原理 测定LH的活性，灵敏度可达0.125?g 静脉注射待测样本前除去一侧卵巢 3h后除去另侧卵巢 比较两侧卵巢的抗坏血酸含量 两者间差与剂量成比例 催产素、促肾上腺皮质激素的测定：适用 7、微量生物测定法 细胞培养生物测定法： （bioassay by in vitro cell culture） 体外培养待测激素的靶细胞 测定激素作用后靶细胞的分泌物含量 间接计算激素的生物活性 可用细胞测定法满足条件： 二、免疫测定法 （immunoassay） 免疫测定法： 先标记 同位素（放射性、非放射性、生物酶、荧光素） 标记抗原（半抗原）或抗体 检测活性：免疫反应产物中 结合的（抗原或半抗原-抗体结合物） 或游离的标记物的活性 间接计算待测激素含量 （一）种类 放射免疫测定（radio-immunoassay，RIA） 酶免疫测定（enzyme immunoassay，EIA） 荧光免疫测定 （fluorescence immunoassay，FIA） 化学发光测定 （chemiluminescene immunoassay，CLIA） （二）基本原理与工作条件 免疫反应系统 tAg + Ag* + Ab ? tAg-Ab + tAg + Ag*-Ab + Ag* 分离系统 方法：离心、洗涤 材料：二抗、活性炭、固相载体等 检测系统： 酶、荧光、同位素、化学发光物质等 表2-14 几种免疫测定方法的工作原理与优缺点比较 三、受体测定法 原理： 激素与靶细胞上受体特异性结合亲和力高 用激素的受体代替免疫测定中的抗体 从而对激素进行测定 优点： 与免疫测定法相比 用受体测定法的结果更接近于生物测定 因为激素只有与其受体结合后 才能表现其生物学活性 方法种类 受体测定法：用激素的受体代替抗体 放射受体分析法 （radio rece