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脐血Lj成人外周血树突状细胞表型和功能的比较研究 中文摘要 脐血与成人外周血树突状细胞表型 和功能的比较研究 专 业：妇产科学 硕士研究生：林胜谋 导 师：方 群教授 中文摘要 在机体执行免疫防卫、识别并清除入侵病原体的免疫应答过程中，由于个 体的差异或同一个体免疫状态的不同，使得机体对相同抗原可能产生不同的应 答水平。如新生)L／HflJg对某些病原体较成人具有易感性；相对于成人骨髓移植， 脐血干细胞移植沁现的移植物抗宿主反应(GV}D)较少。许多学者对这种差 异的原因进行了深入的研究，目前，包括淋巴细胞、细胞因子等免疫组成在新 生儿和成人间的差别已有报道，但作为免疫应答的始动着～一树突状细胞 (DC)，在两者间的差异仍研究较少。 DC是目前所知的机体内功能最强的专职性抗原提呈细胞(APC)，有别于 其它抗原提呈细胞，DC最大的特点是能够显著刺激初始T细胞进行增殖。由 于抗原提呈和免疫激活是免疫反应的两个重要环节，有理由相信新生JL／胎儿与 成人DC生物学特性上的差异导致了其应答水平的不同。为此，本实验将通过 诱导培养脐血和成人外周血的单核细胞贴壁成分(DC前体)的方法，获得足 淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激淋巴细胞增殖的能力；希望通过比较其表型 和功能的差异，探讨DC在新生儿免疫应答低下中的可能机制。 脐呲与成人外周血树突状细胞表型和功能的比较研究 中文摘要 材料与方法 1．研究对象 本实验共收集足月健康新生儿脐血15例，健康成人外周血20例。 2．树突状细胞的分离与培养 本实验采用密度梯度离心法分离脐血(或外周血)单个核细胞，培养2h后 TNF．q刺激24h。 3．淋巴细胞的分离及保存 非粘附细胞以含rhlL．2的RPⅦ1640培养，作为反应细胞。 4．DC表面标志分析 第7天流式细胞仪检测DC表型分子CD83、CD86和HLA—DR的表达。 5．混合淋巴反应 培养7天后经丝裂霉素处理过的DC和自体／异体淋巴细胞按20：l的比率 混合培养72h，MTT(噻唑蓝)法检测淋巴细胞增殖反应，计算DC的刺激指 数(SI)。 结果 1．树突状细胞的鉴定 培养第7天，倒置显微镜下见脐血或外周血诱导的细胞均表现出典型的树 突状细胞形态。透视电镜可见细胞膜大量皱褶和不规则突起：细胞体积显著增 大，胞浆中富含线粒体。 流式细胞仪检测显示两组DC均高度表达HLA．DR(脐血96．2％±6．0％， 外周血95．5％±3．2％)，中高度表达辅助刺激分子CD86(脐血64．6％±8．3％， 外周血79．5％4-9．7％)，中低度表达树突状细胞特异性标志CD83(脐血30．9％ ±8．2％，外周血34．6％±9．7％)；而单核细胞特异性标志CDl4表达极低(脐血 3,6％±1．9％，外周血3．8％±2，0％)。 混合淋巴细胞反应(MLR)显示DC有显著刺激淋巴细胞增殖的能力，脐 一Ⅱ一 脐血与成人外刷血树突状细胞表型和功能的比较研究 叶1文摘瘿 血组与外周衄组的刺激指数分别为2．2(2．3)+和I．4(1．4)。 2．脐血与成人外周血树突状细胞的比较 流式检测表面标志显示脐缸DC中CD86的表达较外周虹低，差异有显著 性；而CD83和HLA—DR的表达无显著性差异。 混合淋巴细胞反应显示无论是自体混合淋巴细胞反应还是异体混合淋巴细 胞反应，成人外周血DC的刺激指数(SI)均显著高于脐血DC。而脐缸DC对 自体淋巴细胞和异体(成人)淋巴细胞的刺激效能无显著性差异。 结论 1．新生儿脐血来源的DC表达辅助刺激分子CD86较成人外周血DC低， 可能是脐血DC刺激T淋巴细胞增殖能力低下的原因之一；两组间CD83、 HLA．DR表达无差异。 2．