猪腺病毒的分离鉴定.pdfVIP

广程夫学磋士学蹙论文 猿藏癀毒鳇分舞萼整定 猪腺病毒的分离与鉴定 摘要 腺病毒载体是继逆转录病毒载体后在基因治疗、基因免疫等方颟应用 舞发霉较翠鼠较成熟的一种基因载体。与逆转蒙瘸毒载体楣比，腺瘸毒载 体能高效地把外源基因转运到各种靶细胞和组织中，其作为真核细胞鏊因 转移载体具肖制备简便、宿主范围广、感染性强、包装容爨大、病毒繁殖 ， 滴度高、安全性好等优点。便鬲菲人类豫病毒作为载律主要是因势它致病 性低甚至没有致病性，而且动物腺病毒与人腺瘸毒具有相似的基因组结构， 露蓠不霜酶渤甥藤病毒匹被羿发{擘为藏瘸毒袭达载俸，翔午浆痰毒三獾 (BAd3)、犬腺病毒二型(CAd2)、黑猩猩腺病毒～型、绵羊腺病毒七型 (FAdl，8，9，10)。税人的血清中不存在动物腺病毒中和抗体，说明动物 艨瘸毒不在人群孛流行，瑟且， 预先毒在于入邸实验动物孛[篓JHAd5中和 抗体不交叉中和动物腺病毒，此外，动物腺病毒能有效地转导人和非人类 缨胞，因此，动物腺病毒作为载体用于人和兽医将更为萄效。 本研究根据猪腺病毒保守透六邻体基因设计两对简并弓i物，建立了 nested PCR的检测方法，对5l份瘸猪的气管分泌物作检测，结果只商1份 怒阳注。然褥，我稻用蒸中的13份蕊性病瓣接种PK-15细胞，徽病毒分离， 结果传到第二代时一份为nested PeR阳性，传到第三代时供有lO份为 nested PER鼯链，瘸霉分离鼯毪搴为76。溅。其孛有瑟份传委第鏊锭霹弓| 广薅大学硕士学使论文 猪骧病毒豹分毒与攀定 超细胞病变，细胞成葡萄串状脱落，而且连续传8代后都能稳定地出现细 胞病变，其余六份仅nestedPER嗣性。这是溺内营次分离翻麓猪艨瘸毒。 对所分离到的病毒随机抽取引起细胞病变的1份和不弓f起细胞瘸变的l 的特异性片段，经克隆与测序，以及序列比较，发现GXTL株与猪腺病毒五 95．3％。 培养、提纯以及电镜观察，可见到二十面体对称、无囊膜、有纤突的病毒 颗粒。本研究为进一步研究猪腺病毒的生物学特性及其载体的构建打下基 础。 关键词：猪朦病毒GXTL株猪熬病毒GXIS?撩六邻体基因壳酝 ￡塑查兰堡主堂堡堡苎 塑塑整塑坌苎羔堡童一 AND ISOLATl0N oFPo薹tCINEADENOVIRUS ABSTRACT 1nthe andmaturer carrier vectorisanearlier Adenovirus genetiC of and i c i mmunizationafterretrovi ral therapygenet respectgene i wi thretrovi raI i rusvectorcan vector。Comparng vector，Adenov into celI and totransfer target highlyperformance foreigngene