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为什么要纯培养微生物？ 如何纯培养微生物？ 如何保藏纯培养微生物？有哪些保藏方法？ 前言 微生物无处不在，在我们的生活中起着至关重要的作用。 我们无时无刻都在享受微生物给我们带来的恩惠，也无时无刻都在受到微生物给我们带来的威胁。 人类何以面对？——了解它，利用它，干掉它？ 微生物和我们—人类有着密切和重要的关系。 1 有益关系： 绝大多数微生物对人类是有益的，而且是必需的。 可以生产许多作用产品，如面包、奶酪、啤酒、抗生素、疫苗、维生素、酶等。 是人类生存环境中必不可少的成员。 是地球物质循环的参与者。 2 有害关系： 少部分可以致病。 如瘟疫—鼠疫由鼠疫耶尔森氏菌引起，1347年的一场鼠疫几乎摧毁了整个欧洲，此后80年间消灭了约75%的欧洲人； 肺结核、霍乱分别由结核杆菌和霍乱杆菌引起； SARS由SARS病毒引起； AIDS 人类正面临的一场新的瘟疫。 何以了解微生物，改造微生物? 研究微生物首先必须把它们从众多的微生物群体中分离出来，培养好微生物。 微生物培养技术是进行生物学研究的基础。只有熟练掌握微生物的培养技术，生物学研究才得以进行，才能减少微生物给人类带来的伤害，才可能利用好微生物给我们人类带来福音。 培养物(culture)：在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物。 纯培养(pure culture)：只有一种微生物的培养物称为纯培养。 纯培养技术：把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的技术产物纯培养技术。 培养基(culture medium)：适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。 无菌技术(aseptic technique)：在分离、接种及培养纯培养物时防止被其它微生物污染的技术称为无菌技术。（培养基质无菌，操作过程防菌） 菌落(colony)：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体称为菌落。 菌苔(lawn)：固体培养基表面众多菌落连成一片时即为菌苔。 第一节 微生物的分离和纯培养 微生物培养的常用器具及其灭菌 常用器具： 试管：常用棉花塞塞口，也可用金属、塑料或硅胶帽塞口。 三角瓶：常用棉花塞塞口，用来培养时则用8层纱布封口。 平皿：由正反两个盖互扣而成，专门用来培养微生物。 灭菌： 可以单独灭菌，也可与培养基或其它需要灭菌的物质一起灭菌 常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法，玻璃器皿单独灭菌时也可用高温干热灭菌法。 1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 接种环、接种针、接种铲等。 灭菌方法：用火焰灼烧灭菌。 无菌操作技术 培养方法 1、用固体培养基分离纯培养； 2、用液体培养基分离纯培养； 3、单细胞(单孢子)分离； 4、选择培养基分离培养； 5、二元培养物法培养。 1、用固体培养基分离纯培养 固体培养基经熔化后倒入无菌平皿中，冷却凝固，所得的盛有固体培养基的平皿称为培养平板，简称平板。 通过稀释，使微生物在固体培养基上形成单个菌落的方法。 主要有稀释倒平板法；涂布平板法；平板划线法；稀释摇管法。 （1）、稀释倒平板法 将待分离的材料用无菌水进行一系列稀释(1:10、1:100、1:1000、1:1000…，又表示为10-1、10-2、10-3、10-4….)。 分别取不同稀释液少许(通常取0.1ml)，与已熔化并冷却至50℃左右的固体培养基混合，倒入已灭菌的培养皿中，冷却凝固后，保温一定时间即可出现菌落。挑取单个菌落即得到纯培养。 （2）、涂布平板法 稀释方法同“稀释倒平板法”。 将有熔化的固体培养基倒入无菌平皿中，冷却凝固后，分别取不同稀释液少许(通常取0.1ml)滴加在平板表面，用无菌玻璃涂棒(推棒)将菌液均匀涂布在整个平板表面，培养后挑取单个菌落。 （3）、平板划线法 用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料。 在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其它形式的连续划线，微生物随着划线次数的增加而被逐步稀释。 培养后形成单个菌落。挑取单个菌落即得纯培养。 （4）、稀释摇管法 主要用来对氧敏感的厌氧微生物。 将一系列盛有固体培养基的试管加热使培养基熔化，冷却并保持在50℃左右，将待分离的材料用这些试管进行一系列稀释，试管迅速摇动均匀，冷却凝固后，在培养基柱表面倒入一层无菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，使培养基与空气隔开。培养后在培养基柱中间形成单个菌落。 2、用液体培养基分离纯培养 主要用来分离培养细胞大的细菌、原生动物和藻类。 常用稀释法。 将待分离的材料接种于液体培养