第四章酶的提取与20121127资料.ppt

第四章 酶的提取与分离纯化及干燥 酶的提取和分离纯化是指将酶从细胞或培养基中取出，再与杂质分开，而获得与使用目的要求相适应的有一定纯度的酶产品的过程。 第一节 细胞破碎 组织细胞的破碎方法很多，有机械方法、物理方法、化学方法和生物化学方法等。在破碎前，材料常需要预处理，如动物材料要除去与实验无关甚至有妨碍的结缔组织，脂肪组织和血污等，植物种子需要除壳，微生物材料需将菌体和发酵液成分分开等。 不同规模、不同材料和要求，使用的破碎方法和条件也不同。一些坚韧组织，如肌肉、植物的根茎等，常需要强烈的搅拌或研磨作用，才能把其组织细胞破坏。而比较柔软的组织如肝、脑等，用普通的玻璃匀浆器即可达到完全破坏细胞的目的。 对同一实验材料，由于实验目的（要求）的不同，采用的破碎方式也存在一定差异，如提取中的核酸和提取其中的核苷酸，前者必须保持十分温和的条件，以保持分子的完整性；后者可采用强烈手段。 1． 机械法 主要通过机械剪切力的作用使组织细胞破碎的方法，常用的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等。 　1）组织捣碎机 （捣碎法） 利用捣碎机的高速旋转叶片所产生的剪切力将组织细胞破碎。转速可高达10000r／min。常用于动物内脏、植物肉质种子、柔嫩的叶芽等比较脆嫩的组织细胞破碎，也可用于微生物，特别是细菌的纲饱破碎。此法在实验室和生产规模均可采用。由于旋转刀片的机械切力很大,制备一些较大分子如核酸则很少使用。　 JJ-2型组织捣碎机? 技术数据： ???电源电压：交流220V????50Hz ???电机功率：120w ???调????速：启动—12000转/分 ?? ???定????时：5—60分 容量范围：50—500ml、最大可达1000ml  2）研磨法 利用研钵、石磨、球磨、细菌磨等研磨器械所产生的剪切力将组织细胞破碎。 研钵 多用于细菌或其他坚硬植物材料，研磨时常加入少量石英砂，玻璃粉或其他研磨剂，以提高研磨效果。 细菌磨 是一种改良了的研磨器，比研钵具有更大的研磨面积，而且低部有出口。操作时先把细菌和研磨粉调成糊状，每次加入一小勺，研磨20-30秒即可将细菌细胞完全磨碎。 玛瑙研钵 3）匀浆法 利用匀浆器所产生的剪切力持组织细胞破碎。匀浆器一般由硬质磨砂玻璃制成，也可由硬质塑料或不绣钢等制成。通常用来破碎那些易于分散，比较柔软，颗粒细小的组织细胞。大块的组织或细胞团需先用组织捣碎机或研磨器捣碎分散以后才能进行匀浆。匀浆器的研钵磨球和玻璃管内壁之间间隙保持在十分之几毫米距离，破碎细胞的程度比组织捣碎机高。 2.物理破碎法 通过温度、压力、声波等各种物理因素的作用，使组织细胞破碎的方法，统称为物理破碎法。物理破碎法多用于微生物细胞的破碎。 1）温度差破碎法 通过温度的突然变化使细胞破碎。适用于较脆弱易破碎的细胞。 1）反复冻溶法 先将样品深冷至-1520度使之冻固，再缓慢的融化，反复多次，多用于动物性材料。 2）急热骤冷法 将材料投入沸水中，维持85-90分钟，至水浴中急速冷却，此法可用于细菌及病毒材料。　 2）压力差破碎法 通过压力的突然变化使细胞破摔。常用的有高压冲击、突然降压和渗透压差等方法。 JG-1A/JG-2型高压细胞破碎机 （54600元） 本机利用高压原理对细胞进行挤压破碎,特别适用于厚壁细胞、细菌和较浓样品的破碎，具有快速、方便、无噪声的特点。 产品特点：技术参数： 电压：380V 容量：1－50ml/次，可连续加样，用于科研(JG－ ⅠA) 20－150ml/次，可连续加样，用于生产(JG-Ⅱ) 最大破碎压力:300Mpa 3）超声波破碎法 通常人的耳朵可听到的声音频率范围为16至20kHz，频率高于20kHz的波称之为超声波。 此法多用于微生物材料，且多在实验室使用。 该机是利用一种超声波在液体中产生空化效应的多功能、多用途的仪器；它能用于各种动植物细胞、病毒细胞、细菌及组织的破碎，也可用于各类无机物质的破碎重组，同时可用来乳化、分离、匀化、提取、消泡清洗及加速化学反应等。 3.化学破碎法 化学破碎法是应用各种化学试剂与细胞膜作用，使细胞膜的结构改变或破坏的方法。 常用的化学试剂可分为有机溶剂和表面活性剂两大类。 4.酶促破碎法 在一定条件下，通过外加的酶或细胞本身存在的酶的作用使细胞破碎。 第二节 酶的提取 提取是指在分离纯化前期，将经过处理或粉碎了的细胞置于一定条件和溶剂中，让被提取物充分地释放出来的过程。在不同提取过程中，所选用的溶剂的性质、pH值、离子强度、抽提温度、介电常数等因素是提取成败的重要因素。要达到分离提纯的目的，必须灵活地应用这些因素。 第二节