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一、三法破解酶实验难题 探究酶的催化作用、专一性、高效性及影响酶活性的因素,是高考的热点和难点。遵循“对照原则”利用“对比法”进行探究,是解答此类试题最基本的思路和方法;分组编号→施加实验条件→观察实验现象→得出结论,是此类实验最基本的步骤。下面对“破解”酶实验难题的三个方法进行分类分析: 1.试剂检测法——鉴定酶的本质 (1)设计思路:从酶的化学本质上来讲,绝大多数的酶是蛋白质,少数的酶是RNA。在高中教材中常见的一些酶,如淀粉酶、蛋白酶等,其本质都是蛋白质,所以,对酶本质的鉴定常常是变相地考查蛋白质的鉴定方法。因此,使用双缩脲试剂产生紫色反应的鉴定方案即可。 (2)设计方案 2.对比法——探究或验证酶的高效性、专一性及影响酶活性的因素 (1)验证酶的高效性 ①设计思路:验证酶高效性的方法是“对比法”,即通过对不同类型催化剂(主要是与无机催化剂作比较)催化底物反应速度进行比较,得出结论。 ②设计方案 (2)验证酶的专一性 ①设计思路:验证酶专一性的方法也是“对比法”,常见的有两种方案:底物相同但酶不同或底物不同但酶相同,最后通过观察酶促反应能否进行得出结论。 ②设计方案 (3)探究不同环境因素对酶活性的影响 ①设计思路:采取对比的手段,将待探究的环境因素施加到实验组上,将其与对照组比较,观察酶促反应速率的变化,就可确定该环境因素对酶活性的影响。 ②设计方案 3.梯度法——确定酶的最适温度和pH (1)设计思路:常用“梯度法”来探究酶的最适温度(或pH),设计实验时需设置一系列不同温度(或pH)的实验组进行相互对照,最后根据实验现象得出结论:酶促反应时间最短的一组所处的温度(或pH)即最适温度(或pH)。相邻组间的差值(即梯度值)越小,测定的最适温度(或pH)就越精确。 特别注意:在设计实验过程中,根据“单一变量原则”,除自变量(如温度或pH等)成等差数列相互对照外,其他所有无关变量都必须相同(包括材料的大小、质量、生长状况等)。 (2)一般步骤 引申:“梯度法”在生物学实验中的应用较广,既可用于酶的最适温度、最适pH的确定,也可用于激素、药物等最佳浓度的确定等,复习过程中一定要留意总结。 1.(2013年高考江苏卷改编)为了探究温度、pH对酶活性的影响,下列实验设计合理的是( ) A.实验① B.实验② C.实验③ D.实验④ 解析:过氧化氢受热会分解,因此不宜用过氧化氢酶探究温度对酶活性的影响,实验①不合理;蔗糖酶不能催化淀粉水解,故实验③不合理;斐林试剂可与酸反应,影响物质检测,实验④不合理。 答案:B 2.低温迫使植物细胞产生大量对细胞有害的过氧化产物,如脂质过氧化产物(MDA)。超氧化物歧化酶(SOD)能够消除过氧化产物,从而增强植物的抗冷性。研究人员进行了“水杨酸对水稻幼苗抗冷性的影响”实验,步骤及结果如表所示。 (1)表中①是____________,②是____________。实验设计时每组取50株水稻幼苗,而不是1株,目的是__________________________ ______________________________________________________。 (2)本实验需要控制的无关变量有________________________(至少写两点)。 (3)组别1和2对照可得结论是_______________________________ _______________________________________________________。 组别2~8可得到的结论是________________________________ ______________________________________________________ _____________________________________________________。 在5 ℃条件下,2.0 mmol/L的水杨酸对水稻幼苗抗冷性的影响是________(填“增强”或“减弱”)。 (4)请根据5 ℃条件下的实验结果,完成水杨酸浓度与SOD活性关系的坐标折线图。 解析:(1)2组与3~8组之间应形成对照,根据单因子变量原则,表中①应为5 ℃的蒸馏水浇灌,②是5 ℃。实验对象多可避免偶然性,使实验结果更准确。(2)除自变量以外,对实验结果有影响的变量均为无关变量,比如蒸馏水和水杨酸的浇灌量、培养时间、幼苗发育情况等。(3)组别1与2之间的变量为温度,且低温时SOD活性较大,说明环境温度降低时,水稻幼苗自身可增强抗冷性。分析2~8组SOD活性可知,在一定范围内随着水杨酸浓度的增加,水稻的抗冷性增强,当水杨酸浓度增加到一定值时,水稻的抗冷性开始减弱。与2组比较可知,在5
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