氧化应激对nk2d配体表达的影响.pdfVIP

北京协和医学院硕士研宄生论文 中义摘要 中文摘要 氧化应激对NKG2D配体表达的影响 硕士研究生： 李成红 导 师： 何维教授 崔莲仙教授 导师小组： 马驰助理研究员 细胞等免疫细胞表面，在免疫应答中起着非常重要的作用。NKG2D有多种配体，现 已发现的配体包括人的UL—16结合蛋白(UL．16bindingproteins，ULBPs)、非经典性 MHC classlchain-relatedmolecules I类链相关分子A／B(MHC A／B，MICA／B)和鼠的 acid 维甲酸诱导的基因(Retinoicinducible genes．1，RAEI，a、p、丫、8、￡)、次要组 minor 织相容性抗原H60(thehitoeompatibility ULBP．1ike 录产物l(murine transcriptI,MULTl)。NKG2D配体分子在正常组织中低表 达或不表达，但在肿瘤组织或处于氧化应激、热休克、病毒感染等应激状态时表达 上调。据报道，氧化应激可使气道上皮细胞NKG2D配体的某些分子表达上调。本工 作旨在研究氧化应激对NKG2D配体表达及其功能的影响。主要工作如下： 一、氧化应激对细胞NKG2D配体表达影响的研究 我们选取8种肿瘤细胞以及从正常人外周血中分选T细胞和单核来源的树突状 dendritic 细胞(the cell，moDC)，在培养基中加H202使其处于氧化 monocyte．derived 应激状态。应用RT-PCR、Real．timePCR和流式细胞仪等方法分别从mRNA水平和 蛋白水平检测肿瘤细胞ULBPs及MICA／B的表达变化，流式细胞仪分析氧化应激 对T细胞和moDCULBPs及MICA／B表达的影响。并针对氧化应激前后不同肿瘤 细胞ULBPs及MICA／B表达的不同变化，选取五种细胞分析其变化对NK细胞功 能的影响。结果显示，无论是肿瘤细胞，还是正常细胞都仅表达众多NKG2D配体 中的一种或几种，而且各种细胞的表达谱各不相同。细胞NKG2D配体在mRNA水 平与细胞表面的蛋白表达并不完全一致；其中BGC823细胞表面蛋白与mRNA的 表达较为一致。在氧化应激之后各种配体的表达都有所升高，293T、Raji和K562 细胞的大多数NKG2D配体在氧化应激之后都有不同程度的提高。而Jurkat、 北京协和医学院硕士研究生论文， 叶I文摘要 几乎没有变化。新鲜分离的T细胞应激前仅表达低水平的ULBP2，而不表达MICA； NKG2D配体，但应激前后表达水平变化不大。氧化应激增强了NK细胞对BGC823、 胞对293T、Jurl(at和HeLa细胞的杀伤作用变化不显著。 二、小鼠氧化应激模型中NKG2D配体的表达研究 建立小鼠吸入臭氧的动物氧化应激模型，利用RT-PCR、RealqimePCR和免疫 组化方法分析氧化应激对小鼠各组织‰l和MULTI表达的影响。并用流式细胞仪 的表达情况。Real．timePCR结果显示，应激后RaeI的表达在皮肤和淋巴结有所降 低，在胸腺、小肠、脾脏表达升高。MULTI的表达在皮肤和小肠略有升高，但变 化不明显；MULTI在脾脏和淋巴结的表达下降，在胸腺基本没有变化。而免疫组 织化学的结果表明，小鼠氧化应激后，MULTI在胸腺的表达降低，在淋巴结的表 达略有升高，在脾脏和小肠的表达基本没有变化：Rael在胸腺表达略有升高，在淋 巴结、脾脏和小肠的变化不明显。 综上所述，氧化应激可以诱导细胞NKG2D不同配体的表达，从而提高NK细 胞对其