胰岛素、葡萄糖脂肪酸对牛体外脂肪细胞抵抗素mrna丰度的影响.pdfVIP

胰岛素、葡萄糖、脂肪酸对牛体外脂肪细胞抵抗素mRNA丰度 的影响 摘要 肥胖牛易发生胰岛素抵抗，使得胰岛素的敏感性下降，影响胰岛素对体内糖、脂 肪的代谢的调节。脂肪代谢紊乱疾病和脂肪细胞分泌的各种因子有很大的关联，而脂 肪细胞的体外培养是研究脂肪细胞因子的一种理想的体外模型． 抵抗素被认为是联系胰岛素抵抗和肥胖的一个纽带，研究认为抵抗素可以引起肝 脏的胰岛素抵抗，并且在奶牛泌乳期间，脂肪组织抵抗素表达升高。本实验利用体外 培养犊牛前脂肪细胞的原代及传代培养技术和半定量RT—PCR方法研究脂肪细胞因子 抵抗素在脂肪细胞分化过程中的表达情况，及不同浓度胰岛素、葡萄糖、非酯化脂肪 酸对抵抗素mRNA丰度的影响。为了解奶牛胰岛素抵抗、肥胖和抵抗素之间的关系奠 定理论和实验基础． 首先，对原代培养的脂肪细胞进行传代培养。在传代培养过程中，绘制细胞生长 曲线，脂肪细胞油红O含量变化曲线并根据油红染色情况判断脂肪细胞的分化程度， 用RT-PcR的方法检测细胞分化标志物脂蛋白酯酶(LPL)、3一磷酸甘油酯脱氢酶、 (GPDH)瘦素(LP)。用胎盘蓝染色计算细胞冻存后的存活率。细胞传代培养后， 保持脂肪细胞的蓄积脂肪的特性，细胞生长曲线与原代脂肪细胞的生长曲线保持一 致，并能够检测到细胞分化标志产物脂蛋白酯酶(LPL)、3一磷酸甘油酯脱氢酶 (GPDH)、瘦素(LP)。细胞冻存复苏后保持87％的存活率。表明可以利用传代后的 脂肪细胞进行细胞因子的研究，并为奶牛脂肪细胞株的建立提供理论依据。但利用检 测mRNA表达的方法不能判断牛脂肪细胞分化的情况，这与以往报道的人和鼠脂肪细 胞不一致。 然后从犊牛的网膜组织提取总RNA，通过一对引物，成功的克隆了奶牛的抵抗 素151bpcDNA序列，经测序分析，同源性达到98％。在此基础上，在原代培养脂肪 照，定量分析脂肪细胞分化过程中抵抗素mRNA丰度变化．结果表明，脂肪细胞分化过 到最低值，之后又开始回升。据此证明，抵抗素mRNA在前脂肪细胞和成熟脂肪细 胞都有表达，在细胞分化过程减低，而在成熟脂肪细胞有随着脂肪形成的增加而增加 的趋势，这一结果与人及鼠的研究结果有差异。但是我们恰恰观察了人和鼠类实验所 一时间。最后利用传一代培养的脂肪细胞研究不同浓度的胰岛素对抵抗素mRNA丰 度的影响，利用原代培养的脂肪细胞研究不同浓度的葡萄糖、非酯化脂肪酸对抵抗素 mRNA丰度的影响。结果显示，高浓度的胰岛素对抵抗素mRNA表达有促进作用，胰 时增幅更大，单因子方差分析表明，差异显著(pO．05)。葡萄糖能够促进脂肪细胞 抵抗素mRNA表达，并呈浓度依赖性增加。同对照组相比，各浓度梯度葡萄糖处理 IIlM、1．5 差异显著。非酯化脂肪酸对抵抗素mRNA的表达影响很小，仅1 r【lM浓度同对 照组略有降低，O．5IIlM略有升高。统计分析表明，各组间差异显著。 实验结果表明，胰岛素、葡萄糖参与调节抵抗素mRNA的表达。并认为抵抗素 在奶牛酮病和脂肪肝的发生发展过程中发挥着作用。 关键词：犊牛前脂肪细胞传代培养，抵抗素，mRNA丰度 Effectof and acidonResistinmRNA of fatty insulin，glucose expression boVine invitro adipocyte Abstract in Theinsulin．resistancemavoccurfhtcowwhichdecreasessensitivitvtoinsulin．and innuences ofinsulinon and secretcd adius恤1ent glucosef缸metab01ism．Cytokinesbv