草鱼CD81基因的克隆及功能分析.pdfVIP

第39卷 第3期 水 生 生 物 学 报 Vo1．39．NO．3 2015年 5月 ACTA HYDROBIOL0GICA SINICA M ay， 2015 doi：10．7541／2015．62 草鱼 CD81基因的克隆及功能分析 李华英 ，2 黄 容 杜富宽 廖兰杰 李勇明 汪亚平 (1．中国科学院水生生物研究所，淡水生态与生物技术国家重点实验室，武汉 430072；2．中国科学院大学，北京 100049) 摘要：为研究白细胞表面分化抗原 8I(CD81)的功能，对草鱼 CD81进行了克隆，CD81全长共 1376bp，其中 5非翻译区87bp，3非翻译区581bp，开放阅读框为 708bp，包括 8个外显子，7个 内含子，编码 235个氨基 酸。实验采用实时荧光定量 PCR的方法检测了CD81在健康草鱼不同组织 中的表达情况及草鱼出血病病毒 (GCRV)攻毒前后的表达变化情况。结果显示草鱼 CD81在所有被检测组织中均有表达，在头肾中表达量最 高 。在GCRV攻毒前后草鱼鳃 、脾 、肝、肠及头 肾5个组织中的CD81表达量均有明显变化。同时，采用绿 色荧光蛋白(GriP)来示踪 CD81的亚细胞表达部位，激光共聚焦显微镜显示，同人类一样，草鱼CD81定位于 细胞膜 E。 关键词：草鱼；CDS1；四跨膜蛋白家族；基因克隆；组织表达；亚细胞定位 中图分类号：Q144+．2 文献标识码：A 文章编号：1000—3207(2015)03．0468．07 白细胞表面分化抗原81(CD81)是四跨膜蛋 白家 同源性 。在人类的研究中，也 已证明CD81作为丙型 族(TM4SF)的重要成员之一。TM4SF是一类包含 四 肝炎病毒(HcV)的受体，可以与HCV的E区结合 【]。不 次跨膜结构域的蛋白家族 ，他们主要表达在细胞膜 同CD81分子表达水平的细胞系在低HCV数量感染 上，其蛋 白N端与C端均在细胞质 内部，包含两个大 细胞时，表现出不 同的敏感性[1酬。 小不 同的胞外环l1]。研究表明TM4SF可以跟 MHC 到 目前为止，CD81已经在包括斑马鱼 (Danio 分子、整合素、CD4／CD8及B细胞受体复合物相互 rerio)、斑点叉尾鲴(Ictaluruspunctatus)、鲈(Lateolabrax 作用l2]，在细胞生长、分化、增殖、细胞间融合、黏 japonicus)、大西洋鲑 (Salmosalar)、七鳃鳗(Lampetra 附信号传导等过程中均发挥作用[3们。TM4SF并没 japonica)等鱼类 中得到克隆，实验也证实同人类一 有明显的信号基序和模块，它们可以装配形成多蛋 样CD8l也参与了七鳃鳗 的免疫过程，而斑点叉尾鲴 白复合物以便形成广泛的网络参与细胞作用，所有 在受到爱德华杆菌感染后CD81出现 了相应 的上调 的TM4SF间均存在直接 的相互作用，并可与第三者 表达 ”【 叭。草鱼在我国是一种重要 的经济鱼类，但 CD81相互作用 l【。 其养殖常因出血病等各种病毒感染受到影响，因此 CD81在包括免疫在 内的多种生理过程 中发挥 本研究克隆了草鱼中的CD81基 因，并对其进行 了 重要功能。研究证实CD81与T、B细胞分化有关，缺 初步的功能研究，希望为草鱼染病机制的研究提供 失CD81的小 鼠，其B细胞功能异常，但增强了T细 一 些线索。 胞的增殖 l【。也有证据显示缺失CD81的小鼠。T、B 本研究采用基因组搜索、ORF预测 、同源扩增 细胞数 目正常，但在抗原入侵时，抗体生成过程推 及cDNA末端快速扩~(RACE)等多种方法相结合克 迟 【]。CD81分子在不同病毒入侵过程中也发挥着重