结核药敏试验价值 10241147.ppt

药敏试验在耐药结核病治疗中的价值和局限性 武汉市医疗救治中心吴文娟 医生期望的药敏试验 敏感=治疗有效 内容 药物敏感性测定的重要意义 临床治疗的重要参考 流行病学的重要指标 药物敏感性检测方法 手工方法-（ 需要几周） 自动化方法 -Agar Proportion BACTEC 460 TB -L-J Proportion BACTEC MGIT -L-J Resistance Ratio BACT ALERT -Absolute Resistance BACTEC 960 MGIT - E- test TREK 药物敏感性试验常用标准方法 绝对浓度法是由G. Meissner (德国) 于1964年首先提出的,是我国30 多年来一直沿用的药敏试验方法。 比例法是由法国的G. Canetti 和J.Grossete于1963年首先提出,是WHO 全球耐药监测项目中推荐的标准药敏试验方法。二者在临界药物浓度接种菌量、结果判读方法等方面都有一定差别. 抗性比浊法是英国科学家D.A.Mitchison首先提出,由于方法比较烦琐,现已不多用 比例法和绝对浓度法的一致性 比例法和绝对浓度法是测定分支杆菌药物敏感性的二种常规方法,前者是世界卫生组织(WHO) 在“全球结核病耐药监测项目”中推荐的统一方法,后者是我国各级实验室30 多年来普遍沿用的方法。近年来,随着我 国部分省陆续加入WHO 耐药监测项目,二种方法的一致性问题以及药敏试验是否向比例法转轨已成为国内争议的热点 比例法和绝对浓度法的一致性 综合以往国内有关比例法和绝对浓度法的试验报道，对2种方法研究结果显示,比例法和绝对浓度法检测结果的一致率4 药均高达6 %以上,对于结核分支杆菌,二种方法测试H、S、R 和E 的耐药率均无显著性差异。绝对浓度法向比例法转轨，将会使我们的药敏试验结果与国际接轨 ，与国际具有可比性，而不会影响到与我国既往资料的连续性和可比性 比例法和绝对浓度法的区别 (1) 绝对浓度法对接种量（ 10– 3mg）要求十分严格,既要避免由于过量接种产生自然突变的可能,又要保证对照培养基上菌落生长旺盛,相比之下,比例法由于设定了高、低2 个（10-4 、10-6 mg ）接种量的参考系统,且试验结果的判定是通过计算活性单位的比值获得,因此对接种量这一药敏试验的重要变异因素进行了一定程度的校正． 比例法和绝对浓度法的区别 (2) 比例法定义1 %为“敏感”和“耐药”的临界点,而绝对浓度法规定低浓度含药培养基上生长的菌落数多于20 个判断为耐药,按接种菌量的活菌单位计算与比例法的1 %耐药有相同的理论基础。在此基础上,由于绝对浓度法每种药物设定高、低2 个药物浓度,所以绝对浓度法在一定程度上反映了耐药的程度和水平。如果说比例法是定性的药敏试验,绝对浓度法则包含有“半定量试验”之意。 （3）比例法操作较为繁琐，且需定量技术。 药敏试验基础培养基 为无淀粉改良罗氏培养基，配方与酸性罗氏培养基相比只有磷酸二氢钾(KH 2 PO 4 )的量不同，其他成分完全相同。 抗结核药物溶液的配制和稀释 （略） 含药培养基制备 （略） 药敏试验方法 （略） 比例法药敏试验 （过程略） 药敏试验流程 2~3周新鲜纯培养物→磨菌制备１mg/ml的菌液→稀释至适当浓度→接种适当菌量至含药培养基和对照斜面→ 37 ℃培养4周→报告结果 比例法药敏试验结果报告及解释 按以下方式记录菌落生长情况. (1)少于50个菌落: 报实际菌落数 (2)50~100个菌落: 1+ (3)100~200个菌落: 2+ (4)大部分融合(200~500个菌落): 3+ (5)融合(大于500个菌落): 4+ 确定耐药临界点的机构 确定耐药临界点的机构 WHO the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI; formerly known as the NCCLS)美国临床实验室标准化协会 the European Union Co