藏绵羊胃溶菌酶基因的克隆、定量分析及其蛋白性质和结构的预测.pdfVIP

溱燃㈣徽·《麓剿跏蛾s射潮飘∞《阉 藏绵羊胃溶菌酶基因的克隆、定量分析及其 蛋白性质和结构的预测 朱莲莲1，江明锋112，张鹏1，骆美蓉。，李建波1，任洪辉‘，王 永” (1．青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室，西南民族大学生命科学与技术学院， 四川成都610041；2．国家民委与教育部动物遗传育种重点实验室，四川成都610041) 摘 要：本实验旨在研究藏绵羊溶菌酶组织基因组成、分布情况和蛋白质结构。通过RT—PCR方法克隆测序得到藏 绵羊溶菌酶基因核苷酸序列，并对氨基酸的组成和功能活性位点如53一谷氨酸和71一天冬氨酸等进行统计：运用生 物信息学软件对藏绵羊溶菌酶的等电点、信号肽序列等性质进行分析．并构建系统进化树：运用荧光定量PCR方法 对藏绵羊的瘤胃、瓣胃、皱胃、19-脏、气管和肝脏分别进行检测溶菌酶基因的部分组织分布情况及其mRNA的表达 水平。结果表明：此绵羊溶茵酶基因核苷酸序列为447 bp，编码148个氨基酸残基：其mRNA的表达水平在藏绵羊 的瘤胃和瓣胃相对较高，与其他4种组织比较差异显著(P0．05)；皱胃与肾脏也有显著性差异(P0．05)，。 关键词：溶菌酶；克隆；mRNA表达；藏绵羊 中图分类号：$826．2 文献标识码：A 文章编号：0258—7033(20l3)23—0012-06 溶菌酶，又称胞壁质酶，是一种碱性蛋白，主要 键I卜21，从而导致细菌裂解而亡。分布在与健康密切 水解革兰氏阴性菌细胞壁中的肽聚糖的／3—1，4N苷联系的组织细胞中，如骨髓细胞、肾小管、泌乳期乳 腺细胞、唾液腺细胞等f31。蛋清溶菌酶是最早被分离 收稿口蚶J：2013—0l一22；修回日期：2013—03—26 纯化的，随着人们研究的深入和拓展，已经克隆到许 资助项H：闫家科技支撑计划课题(2012BADl3806)：四川省科技 多种类溶菌酶。迄今发现的溶菌酶类型有几十种， 创新产业链示范r程项|J(201INZ0003)；巾央高校基本科研业 主要分为动物型、植物型、微生物型、噬菌体型和基 务_；6I}擘项资金(1lZYXS25．10NZYZJ01) 作并简介：朱莲莲(1984一)，女，江苏泗洪人，硕士 型I +通汛作并 ofTAPlGene inSensitiveandResistant toEscherichiacoliF18 Analysis Expression WeanlingPiglets WANG BAOWen—binl’2+ Jinl，ZHU Chenl，WU Shi-pin91，ZHAOQiao-huil，ZI Sheng—lon91‘2 forAnimal andMolecularof Province， (1．KeyLaboratory Genetics，Breeding，ReproductionDesignJiangsu ofAnimalScienceand College Technology，YangzhouUniversity，JiangsuYangzhou225009，China； ResearchCentreforMolecular ofBreeder 213 2．JiangsuEngineering Breeding Pig，Jiangsu 149，C