紫外可见分光光度法-2015详解.ppt

紫外可见分光光度法与荧光分光光度法 药物研究所分析室 马辰 2015.3.27 紫外可见分光光度法 吸收光谱的来源 所有原子和分子均能吸收电磁波，其对吸收的波长有选择性。这种现象的产生主要是因为原子和分子的能量具有量子化特征 在正常状态下的原子或分子处于一定能级即基态，经光激发后，随激发光子能量的大小，其能级提高一级或数级，即分子由基态跃迁到激发态。 当以某一范围的光波连续照射分子或原子时，有些波长的光被吸收，产生被吸收谱线所组成的吸收光谱 分子的吸收光谱分为三类 转动：只涉及分子转动能级的改变，能级间距离很小，吸收光子的波长长，频率低。能级相差10-3~10-2kcal/mol，单纯的转动光谱发生在远红外区和微波区 振动：振动光谱反映分子转动和振动能级改变，引起这种改变的光子能量比第一种高，两个振动能级相距0.1~10kcal/mol，产生于波长较短，频率较高的近红外区，主要在1~30μ的波长区。 电子光谱：吸收光子后使电子跃迁，产生电子能级的改变，即为电子光谱。能量为20~300 kcal/mol。 电子光谱位于紫外区和可见区，其波长和能量的关系 波长(nm) 180 200 300 400 波数(cm-1) 55555 50000 30000 25000 能量 159 143 95 72 (kcal/mol) 紫外区与可见区 波长(nm) 真空紫外区 10~185 远紫外区 185~200 短紫外区 200~300 近紫外区 300~380 紫色 380~400 蓝色 400~500 绿色 500~580 黄色 580~600 橙色 600~620 红色 620~780 紫外吸收光谱反映分子吸收能量后所产生的电子跃迁，反映分子的电子结构特征，为物质结构的研究提供重要信息，分子的紫外光谱吸收带的波长和强度是化合物的常数之一。 由于仪器和操作方法的限制，紫外光谱只适合于具有不饱和双键系统的分子。电子跃迁受分子结构的影响，所以紫外光谱能部分反映分子中电子间的相互作用。 紫外光谱与红外光谱的区别 紫外光谱图形简单，吸收峰宽且成带状，红外光谱吸收峰较尖且数目多。 紫外光谱主要反映分子中不饱和基团的性质，而不反映整个分子的结构；红外光谱则不仅能反映分子中功能基团的存在，而且与整个分子的结构有关。 特点 紫外光谱不仅能识别分子中的不饱和系统，而且可以测定不饱和化合物的含量 同一物质相同浓度的吸收曲线，应能相互重合，这是定性鉴定的依据之一。 在定量分析中，可提供选择测定的适宜波长。因所需样品量少，通常为微克级或毫克级，所以对测定微量成分，尤其是生物体内的有机化合物更为有利。 紫外光谱与 分子结构的关系 1.电子跃迁类型 2.常用术语 3.吸收带 4.溶剂效应 电子跃迁类型 电子围绕分子或原子运动的几率分布叫轨道。轨道不同电子所具有的能量不同。 紫外可见吸收光谱是讨论分子中的价电子有处于σ轨道上的σ电子，π轨道上的π电子和未参与成键而仍处于原子轨道中的n电子（亦称p电子）。 分子轨道可以认为是当两个原子靠近而结合成分子时，两个原子的原子轨道的s电子就可以线性组合生成两个分子轨道。其中一个分子轨道具有低能量称为成键轨道σ 。另一个分子轨道具有高能量称为反键轨道σ* 。 同样两个原子的π 轨道平行地重叠起来，组成两个分子轨道时，该分子轨道称π轨道和π*反键轨道。 π键的电子重叠比σ键的电子重叠少，键能弱，跃迁所需的能量低。 分子中n电子的能级，基本上保持原来原子状态的能级，称非键轨道。比成键轨道所处能级高，比反键轨道能级低。 分子中不同轨道的价电子具有不同能量，处于低能级的价电子吸收一定能