2014年高考生物专题复习——PCR技术2解读.ppt

一、目的基因的获取 1、目的基因概念： 主要指的是编码蛋白质的结构基因。也可以是一些具有调控作用的因子。 2、目的基因获取方法： 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 化学方法直接人工合成 从基因文库中获取目的基因 基因文库： 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库的构建过程 基因文库的构建过程 利用PCR技术扩增目的基因 PCR的全称： 聚合酶链式反应 PCR的原理： DNA复制 PCR技术扩增目的基因的前提条件： 要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。 利用PCR技术扩增目的基因 * 核技术： 能量的放大 计算机芯片： 信息的集成 20世纪自然科学的两大成就 PCR技术： 生命信息的放大 基因芯片： 生命信息的集成 20世纪生命科学的两大成就 PCR技术 高考专题复习 目的基因的检测与鉴定 基因工程的基本操作程序的步骤： 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如cDNA文库） 基因组文库 限制酶 供体细胞的 全部DNA 大量DNA 片段 拼接到载体上 导入受体细胞扩增 mRNA 单链DNA 双链DNA 逆转录 cDNA文库 模板 原料 引物 　酶 控制温度 ——目的基因DNA ——四种脱氧核苷酸 ——如单链DNA分子片段 ——耐热的DNA聚合酶 ——PCR仪自动调控 PCR的条件： 多聚酶链式反应（Polymerase Chain Reaction），是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。 1988年美国穆里斯（K.Mullis）等人发明，荣获1993年诺贝尔化学奖。 PCR 【基础知识】 一、PCR原理： DNA复制： 半保留复制； DNA的热变性原理。 Taq DNA聚合酶 耐高温。 【基础知识】 一、PCR原理： DNA复制： 半保留复制； 需要提供合成模板； 不能起始新的DNA链，必须要有引物提供3’-OH； 合成的方向都是5’→3’。 DNA聚合酶 【基础知识】 二、PCR条件： 胞内DNA复制与PCR技术的比较： Mg2+,缓冲对 缓冲液 DNA母链 模板 半不连续复制 子链合成 最适温度 温度 dNTP 能量+原料 RNA 引物 解旋酶/DNA聚合酶 酶 解旋酶，边解旋边复制 解旋 PCR 胞内DNA复制 变性 Taq DNA聚合酶 DNA母链 dNTP 3个温度 Mg2+,缓冲对 连续复制 DNA 【基础知识】 二、PCR条件： 引物： 引物设计的原则： 决定PCR扩增产物的特异性和长度。 1.引物长度： 通常为20～30bp，尽量降低引物与非扩增区的同源性； 2.引物内部不能存在部分互补序列； 3.两个引物之间不能存在部分互补序列； 例题 1 【2011年安徽】家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。 采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、 和 。 对干扰素基因特异的DNA引物对 Taq DNA聚合酶 例题 2 【2011年江苏】请回答基因工程方面的有关问题： （1）设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。 ①第一组： ； ②第二组： 。 引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效 引物Ⅰ’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效 （2）PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为 。 DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上 【基础知识】 二、PCR条件： 温度： 70℃～75℃： 90℃～95℃： 55℃～60℃： 变性； 复性； 延伸。 【注意】 具体温度与DNA母链及引物中的G、C含量有关。 例题 3 【2008年江苏】回答下列问题。 （1）在采用常规PCR方法扩增目的基因