013细胞衰老与凋亡1要点.ppt

Caspase-8自剪切活化，激活Caspase-3，Caspase-7 Caspase-3激活Caspase-6。 Caspase可降解结构蛋白、信号蛋白、转录调控蛋白、周期蛋白等等。 Caspase还可降解CAD的调节蛋白，释放出CAD，CAD进入细胞核降解DNA。 CAD 为caspase-activated DNase，存在于胞质中。 Caspase引起线粒体PT（Permeability transition）孔打开，导致线粒体的跨膜电位下降； 细胞色素C被释放到胞质中、激活Caspase-9，后者再激活Caspase-3。 Bcl-2，Bcl-xl均作用于线粒体。 线粒体在CD95诱导的凋亡中的作用 细胞色素释放引起的凋亡。R. Chris Bleackley and Jeffrey A. Heibein 2001? 凋亡信号通路 当细胞接受凋亡信号分子(Fas, TNF等)后，凋亡细胞表面信号分子受体相互聚集并与细胞内的衔接蛋白(Adaptor protein)结合，这些衔接蛋白又募集Procaspases聚集在受体部位，Procaspase相互活化并产生级联反应，使下游caspases活化，细胞凋亡。 下游Caspases活化后，作用底物：裂解核纤层蛋白，导致细胞核形成凋亡小体，裂解DNase结合蛋白，使DNase释放，降解DNA并形成DNA Ladder。 裂解参与细胞连接或附着的骨架和其他蛋白，使凋亡细胞皱缩、脱落，便于细胞吞噬； 导致膜脂PS重排，便于吞噬细胞识别并吞噬。 物理性因子：包括射线（紫外线，? 射线等）， 较温和的温度刺激（如热激，冷激）等。 化学及生物因子：包括活性氧基团和分子，DNA和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生长因子，肿瘤坏死因子?（TNF?），抗Fas/Apo-1/CD95抗体等。 三、细胞凋亡诱导因子及检测 (一) 诱导因子 形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察； DNA电泳：DNA片段就呈现出梯状条带； TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling) 测定法，即DNA断裂的原位末端标记法； 彗星电泳法（comet assay）/单细胞凝胶电泳法（Single Cell Gel Assay） ； 流式细胞分析根据凋亡细胞DNA断裂和丢失，采用碘化丙啶使DNA产生激发荧光，用流式细胞仪检出凋亡的亚二倍体细胞，同时又能观察细胞的周期状态。 (二) 细胞凋亡的检测 彗星电泳 1．细胞色素c诱导0 h 2．细胞色素c诱导1 h 3．细胞色素c诱导2 h 4．细胞色素c诱导3 h 5．细胞色素c诱导4 h 6．阴性对照 7．Marker （ 引自赵允、翟中和） 细胞色素c诱导的凋亡细胞DNA电泳图 * 诺 细胞生物学  Cell biology 河北联合大学 生命科学学院 第一节　细胞的衰老 又称老化，指细胞随着年龄的增加，机能和结构发生退行性变化，趋向死亡的不可逆的现象。 衰老和死亡是生命的基本现象，衰老过程发生在生物界的整体水平、种群水平、个体水平、细胞水平以及分子水平等不同的层次。 第十三章 细胞衰老与凋亡 更新组织：如上皮细胞、血细胞。构成更新组织的细胞可分为３类： ① 干细胞、 ② 过渡细胞、 ③成熟细胞。 稳定组织：可补偿性增生，如：肝、肾细胞。 恒久组织：细胞不再分裂，如神经、骨骼、心肌细胞。 可耗尽组织：如人类的卵巢实质细胞。 一、人体细胞的动态分类 二、细胞衰老的特征（一）形态变化 DNA：复制与转录受阻，端粒DNA、mtDNA缺失。DNA氧化、断裂、缺失和交联，甲基化程度降低。 RNA：含量降低。 蛋白质：含成下降，发生修饰、交联。 酶分子：活性中心被氧化，金属离子丢失，酶分子的二级结构，溶解度，等电点发生改变，酶失活。 脂类：不饱和脂肪酸被氧化。 （二）分子水平的变化 1、代谢废物积累：如：脂褐质 2、自由基攻击：导致DNA、蛋白质变异，正常细胞内存在清除自 由基的防御系统： 酶系统：超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(CAT)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)； 非酶系统：维生素E，醌类等电子受体。 三、细胞衰老的分子机理 （一）差错学派 1、细胞有限分裂学说 “Hayflick”界限，即细胞最大分裂次数。 L. Hayflick (1961)报道，人的成纤维细胞在体外培养时增殖次数是有限的（60~70代）。 细胞增殖次数与端粒DNA长度有关。 （二）遗传论学派 关于细胞增殖能力和寿命是有限的观点。 细胞，至少是培养的二倍体细胞，不是不死的，而是有一定的寿命；它们的增殖能力不是无限的，而是有一定的界