13第十三章基因工程与基因组学要点.ppt

廊坊师范学院生命科学学院 遗传学教研室 第一节 基因工程 一、基因工程概述 二、基因工程工具酶 三、基因工程的流程及相关技术 四、基因工程的发展应用 二、基因工程的工具酶 内切核酸酶(endonuclease) DNA连接酶(ligase) DNA聚合酶（DNA polymerase） RNA聚合酶（RNA polymerase） 反转录酶（reverse transcriptase） 最重要的工具酶是限制性核酸内切酶（restriction endonuclease），也称限制性酶(restriction enzyme), 能识别双链DNA分子中一段特异的核苷酸序列，并在特定的位置将双连DNA分子切断。 （一）外源DNA片段的分离方法 构建基因组文库分离法 差别显示反转录PCR 利用聚合酶链式反应技术扩增目的基因 （三）、重组DNA转入宿主细胞 1.重组DNA转入原核细胞 热激转化法 电穿孔转化法 2.重组DNA转入真核细胞 农杆菌转化法 1.插入失活筛选法 第二节 基因组学 一、基因组学概述 二、基因组图谱的构建 三、基因组图谱的应用 四、后基因组学 人类基因组计划 1990，美国国立卫生研究所和能源部投资＄30亿，启动了人类基因组计划，预计15年时间完成人类基因组全部序列的测定 1996，完成标记密度为0.6cM的人类基因组遗传图谱，100kb的物理图谱 2000，完成草图 2001年2月，公布人类基因组图谱的修订版 2002，完成测序工作 三、后基因组学（postgenomics) 蓝白斑筛选重组质粒 四、基因工程的发展应用 1、基因工程是生物科学基础研究的重要手段 2、利用转基因技术改良植物已取得很大进展并在生产上应用 3、利用基因工程获得大量重组的蛋白、疫苗药物 4、利用基因工程进行不同物种之间的基因传递提供了可能。 转基因动植物--“生物工厂” 5、疾病诊断与基因治疗 6、环境保护 4. 利用基因工程改良动物 推荐几本参考书：1、《基因工程原理与方法》，孙树汉编，人民军医出版社2、《基因工程原理》，吴乃虎编，科学出版社（侧重原理）3、《现代基因工程技术导论》，陈章良编，科学出版社（侧重应用）4、《分子克隆》(第三版)，J. Sambrook et al. 科学出版社（具体的实验方法，分子生物学研究的圣经） 基因组(genome) 泛指一个有生命体、病毒或细胞器的全部遗传物质；在真核生物，基因组是指一套染色体（单倍体）DNA。 一、基因组学概念及范畴 基因组学(genomics) 就是发展和应用DNA制图、测序新技术以及计算机程序，分析生命体（包括人类）全部基因组结构及功能。 基因组学研究的最终目标 获得生物体全部基因组序列 鉴定所有基因的功能 明确基因之间的相互作用关系 阐明基因组的进化规律 基因组学研究内容 结构基因组学(structural genomics) 功能基因组学(functional genomics) 比较基因组学(comparative genomics) 结构基因组学（structural genomics） 基因定位 基因组作图 测定核苷酸序列 遗传图（连锁图） 物理图 转录图 序列图 二、基因组图谱的构建 基因组计划的第一个环节：构建基因组图谱 1.遗传图 连锁图(linkage map)，是指基因标志在染色体上的遗传距离，即确定各基因在基因组中的相对位置和排列顺序。 遗传距离通常由基因在四分体时期染色体交换过程中分离的频率厘摩（cM）来表示。 遗传标记（Genetic marker）指可识别的等位基因。它具有两个基本特征，即可遗传性和可识别性，因此生物的任何有差异表型的基因突变型均可作为遗传标记。 类型： 形态标记（morphological marker） 细胞学标记(cytological marker) 生化标记(biochemical marker) 分子标记(molecular marker) 2.、物理图 以已知核苷酸序列的DNA片断（序列标签位点, STS）为“路标”，以碱基对作为基本测量单位（图距）的基因组图。 DNA上两点的实际距离，即确定基因在染色体上的实际排列顺序，从而对基因定位。 3、转录图 以EST（expressed sequence tag ，表达序列标签）为标记，根据转录顺序的位置和距离绘制的图谱。 4.、序列图 序列图是指整个人类基因组的核苷酸序列图，也是最详尽的物理