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机能学实验设计大纲 实验名称：急性乙醇中毒大鼠学习记忆行为的改变与 脑组织NO含量变化 课题来源：自选 设计班级：2007级临床本科九班 设计人员：蔡林均 设计日期：2010年3月30日 指导老师：张奇兰 成都医学院实验技术教研室 2009年制 一、实验设计的目的意义：实验设计的目的意义，国内外研究现状，存在的问题，解决问题的思路。 目的与意义: 通过观察急性乙醇中毒对大鼠学习记忆的影响并测定脑组织中一氧化氮(NO) 含量的变化，从而探讨乙醇中毒影响学习记忆的分子机制 国内外研究现状：酒精中毒问题在西方国家发病率很高， 已成为严重的社会问题，在我国，随着社会经济发展， 生活水平的提高， 近几年来，酒精中毒的发病率也逐年上升，应引起全社会的高度重视 酒中毒发病率在欧美较高，Gcldcs等报告大不列颠及北爱尔兰联合王国占住院病人总数的10% 左右，而法国、德国、爱尔兰大约接近30 % ，亦有人报告占初次住院病人总数的1.3～17.6 %，某些地区已高达20一30 %。而我国发病率较低，上海1993年报告酒中毒性精神病占初次入院的0.075 %，2000年 为0.15 %，2005年为0．18 %。济南及淄博的报告分别为0.13 %和0.24 %。 由此可见普通人群的发病率正在逐年上升，个别地区已接近西方发达国家 国内各家报告不一， 上海报告发病年龄在21一72岁，济南报告发病年龄 为l5—65岁 ，青岛及淄博的报告分别为25—60岁，25—64岁。烟台则为 22—70岁 。从上述资料看出酒中毒的发病年龄已从老年向中青年转化，说明饮滔年龄逐渐转缸低年龄，有的个别地区已接近国外报告。 2000年郝小娇等做了《急性乙醇中毒大脑皮层氨基酸类递质的变化》选大鼠30只随机分为对照和模型组，采用高效液相色谱紫处法，测定脑中氨基酸的含量变化 2006年贾晓军，王艳芳等做了《orexin——a（神经肽）对乙醇中毒昏迷大鼠的促醒》，首先建立实验模型，通过翻正反射判断大鼠的意识状态，并通过脑电波判断脑电活动变化可以更加深刻的了解乙醇中毒大鼠脑电活动变化 2007年谭春艳，张霞等做了《慢性乙醇中毒性周围神经病大鼠的氧化应激研究》，建立实验模型后，在第8，12，16周分别测 gsh (谷胱甘肽）gsh_px(谷胱甘肽过氧化物酶 )，mda(丙二醛) ，并观察其变化，从而反映大鼠对乙醇损害的代偿性保护 2008年刘宝梅，陆洪英等，做了《乙醇中毒脑干听觉诱发电位变化观察》，将46例乙醇中毒患者与46例正常人进行BAEP(脑干听觉诱发电位 )测定，并与正常受试者比较。观察其波潜伏期，波间期变化。了解乙醇中毒与大脑听觉区的机制 2009年颜红,做了《乙醇中毒大鼠脑内内源性阿片肽系统含量变化》，观察海马内源性阿片肽含量变化，并记录血中乙醇含量，乙醇对中枢神经系统的损害 存在的问题: 李鑫等对《急性乙醇中毒大鼠下丘脑神经递质及行为改变的相关研究》观察乙醇中毒后，雄性大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)神经元合成和释放激素功能及交配变化，以此来探讨急性乙醇中毒后大鼠行为改变的可能机制。并证实了，大鼠交配行为的改变可能与下丘脑GnRH神经元的合成和分泌功能被制并引起血中睾酮水平相应降低有关。 未能证明：摄入高浓度乙醇对下丘脑内GnRH神经元合成和释放激素的功能有显著的抑制作用，但随着乙醇浓度降低，抑制作用逐渐减弱。其可能原因是乙醇阻断了GnRH神经元终末端对NO的反应性，使GnRH神经元合成和释放减少，但其具体机制尚不十分明确 littleton采用细胞外记录法在伏隔核片制备上研究乙醇作用，探讨乙醇中毒的细胞机制。证实了，酗酒者常发生乙醇中毒性“记忆缺失”，是与乙醇抑制海马中N一甲基一D一天冬氨酸受体有关。 未能证明：长期饮酒者脑内N一甲基一D一天冬氨酸受体密度增加的机制，猜测可能是乙醇对谷氨酸系统抑制后出现的代偿反应。 解决问题的思路：动物分组与模型建立，Y一型迷宫检测学习记忆，用试剂盒对脑组织No含量检测 参考文献： [1] Keynes RG，Garthwaite J．Nitric oxide and its role in ischemic brain injury[J]．Curt Mol Med，2004，4(2)：179— 191． [2] 刘惠卿，李文斌，李清君，等．脑缺血预处理对大鼠海马CA1区一氧化氮合酶活性和一氧化氮含量的影响[J]．中国病理生理杂志，2006，22(1)：88—92． [3] Ponomarev I，Crabbe JC．A novel method to assess initial sensitivity an d acute functional tolerance to hypnotic effects of ethan