选修3基因工程操作程序要点.pptVIP

本节知识内容 什么叫平末端？ 限制酶所识别的序列有什么特点？ 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 图1-1 限制酶识别序列的中心轴线 磷酸二酯键 右图示某DNA片段，有关该图的叙述中，不正确的是 A．②③④可形成DNA的基本组成单位 B．②③④构成的结构在DNA中特定排列顺序可代表遗传信息 C．某限制性内切酶可 选择⑦作为切点 D．DNA连接酶可连 接①处断裂的化学键 （1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。 （2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。 此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。 (一)从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 PCR反应参数： 　　 　　 中学专用PCR仪是我公司根据生物新课标要求，结合中学教学特点研制而成的。本产品也是经过教仪所专家质检认证的，专门为中学教学而设计，与科研用仪器相比具有许多优点： 1. 操作简便，实验直观 2. PCR原理完整展现 3. 彩色大屏幕，中文菜单，便于学习加深理解 2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： 小 结 ③根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 2.基因文库的构建方法 上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？ 根据已知氨基酸合成DNA法 反转录法 鸟枪法 缺点 优点 操作简便广泛使用 工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因 专一性强 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高 专一性最强 仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 思考:为什么要构建基因文库?直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗? ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、 _______________、___________ (做启动子)、 ___________.前提条件： ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 (二)利用PCR技术扩增目的基因 有一段已知目的基因的核苷酸序列 PCR三步曲 预变性 保温 变 性 90~95℃ 延伸 70~75℃ 退火 55~60℃ 变性 94 ℃ 20 s 退火 52 ℃ 20 s 延伸 72 ℃ 20 s 预变性 94 ℃ 30 s 保温 72 ℃ 30s 循环次数 30 ⑥过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 (二)利用PCR技术扩增目的基因 PCR反应的特点 特异性强 灵敏度高 完全自动化 标本纯度 要求低 PCR仪的介绍 中学专用PCR仪 科研用PCR仪 1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。