遗传的物质基础.解读.ppt

第二章遗传的物质基础-DNA 第一节 DNA分子上的两大遗传信息 除了少数的RNA病毒之外，DNA几乎是所有生物遗传信息的携带者。DNA分子携带两类不同的遗传信息： 一、负责蛋白质编码的信息（编码序列）： 为RNA和蛋白质一级结构编码的信息。以 三联体密码子方式进行编码的。 二、基因选择性表达的信息（非编码序列）: 调控信息。 核酸（nucleic acid)生物体细胞内一类重要的生物大分子，是生命遗传信息的携带者和传递者，它不仅对于生命的延续，生物物种遗传特性的保持，生长发育，细胞分化等起着重要的作用，而且与生物变异，如肿瘤、遗传病、代谢病等也密切相关。 因此，核酸是现代生物化学、分子生物学和医学的重要基础之一。 作为遗传物质的DNA具有以下特性： 贮存并表达遗传信息； 能把遗传信息传递给子代； 物理和化学性质稳定； 有遗传变异的能力。 核酸研究的历史 1869年，瑞士科学家Miescher在外科绷带上得到一种含磷酸很高的酸性化合物。 因 存在 于 核 中， 故命名为“核素” (nuclein)； 1889年，Altmann制备了不含蛋白质的核酸制品，命名为核酸(nucleic acid) ，这是首先使用了核酸这个名称； 1910年，Kossel证明核酸的主要是成分是核糖、 磷酸和碱基; 1924年，Feulgen 根据核酸所含核糖的结构差别，将核酸分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA); 1929年，Levine发现核酸中的碱基主要是腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶，并证明碱基、核糖、磷酸可以组成核苷酸，核酸则是由核苷酸组成的； 1943年 Chargaff 等证明DNA中4种碱基的比例并不相等； 1944年，转化作用的发现，证实： 核酸 ? 遗传物质 1952年，噬菌体感染实验； 1953年，Waston和Crick建立了双螺旋模型，这是核酸发展史上的重要里程碑。 Ribose and Deoxyribose 核苷酸的结构 五种碱基都能形成酮式-烯醇式或氨基-亚氨基的互变异构。这两种异构体的平衡关系受介质酸碱环境的影响。 ATP 是生物体内最重要的能量转换中间体。ATP 水解释放出来的能量用于推动生物体内各种需能的生化反应。 ATP 也是一种很好的磷酰化剂。磷酰化反应的底物可以是普通的有机分子，也可以是酶。磷酰化的底物分子具有较高的能量（活化分子），是许多生物化学反应的激活步骤。 2、 GTP (鸟嘌呤核糖核苷三磷酸) GTP是生物体内游离存在的另一种重要的核苷酸衍生物。它具有ATP 类似的结构, 也是一种高能化合物。 GTP主要是作为蛋白质合成中磷酰基供体。在许多情况下, ATP 和 GTP 可以相互转换。 3、cAMP 和 cGMP的性质 环化核苷酸cAMP(3’,5’- 环腺嘌呤核苷一磷酸)和cGMP ( 3’,5’-环鸟嘌呤核苷一磷酸) 是细胞内信号转导过程中重要的调节因子。 cAMP 和 cGMP 的环状磷酯键是一个高能键。在 pH 7.4 条件下, cAMP 和 cGMP 的水解能约为43.9 KJ/mol，比 ATP 水解能高得多。 核苷酸的性质 260nm波长的紫外吸收强。 核酸测定的基础。 DNA与RNA的区别 核酸的书写方法 5’：左侧（上） 3’：右侧（下） AUGGC和AGUGC的碱基组成相同，但表示二段不同的核酸序列。 二、一级结构的测定 DNA分子一级结构的测定即DNA序列测定，是现代分子生物学一项重要技术。 序列分析的目的有二：1）确证性测序。通过测序对突变进行定位和鉴定，应用时测定野生型基因上同源区和突变体的相应序列，比较二者序列差异（已知基因序列）。2）从头测序。目的是提供一段DNA准确的核苷酸序列（未知基因序列）。 测序的常用方法 双脱氧末端终止法测序 （一）原理 双脱氧末端终止法是Sanger等在加减法测序的基础上发展而来的。其原理是：利用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ，以单链DNA为模板，并以与模板事先结合的寡聚核苷酸为引物，根据碱基配对原则将脱氧核苷三磷酸（dNTP）底物的5’-磷酸基团与引物的3’-OH末端生成3’,5’-磷酸二酯键。通过这种磷酸二酯键的不断形成，新的互补DNA得以从5’→3’延伸。Sanger引入了双脱氧核苷三磷酸（ddTNP）作为链终止剂。ddTNP比普通的dNTP在3′位置缺少一个羟基（2’,3’-ddNTP）. ddTNP比普通的dNTP在3′位置缺少一