罗氏ECL.解读.pptVIP

罗氏电发光 罗氏(Roche)Elecsys系列 Elecsys有三种系列产品,1010/2010和E170 前身为德国宝灵曼产品 与日本日立公司联合开发其Elecsys系列 Elecsys1010为Roche自己设计生产 Elecsys2010和E170为日本日立公司OEM产品 配套试剂使用ECL技术,为另一家美国IGEN公司的专利技术 ECL检测技术原理 二价的三联吡啶钌在电场的作用下,失去一个电子氧化成三价的三联吡啶钌 同时,在电场作用下,三丙胺也失去一个电子被氧化,然后脱氢成三丙胺自由基 三丙胺自由基传递一个电子给三价的三联吡啶钌使之进入激发态 激发态的三联吡啶钌不稳定,以发射一个波长为620nm的光子的形式释放能量而回到基态三联吡啶钌不被消耗,即发光标记物可循环发光 ECL 原理图 三丙胺(tripropylamine,TPA) ECL的测定模式 ECL其它技术特点 标记物三联吡啶钌分子量小,可标记任何抗原,抗体及核酸,水溶性,高稳定,确保反应的高效和稳定,无噪音干扰 链霉亲和素-生物素包被技术 聚苯乙烯直径2.8微米的磁性微球 电化学发光标记物--- 三联吡啶钌 N羟基琥珀酰胺(NHS)酯 磁性微粒子固相 亲和素- 生物素 亲和素- 生物素 ECL的优势 灵敏度高(10-12~10-18) 检测线性宽(7个数量级) Elecsys 2010系统浏览 Elecsys 2010系统浏览 Elecsys 2010系统浏览 Elecsys 2010系统浏览 Elecsys 2010系统浏览 Elecsys 2010系统浏览 Elecsys 2010系统浏览 Elecsys 2010系统浏览 Elecsys 1010系统浏览 Elecsys 1010系统浏览 Elecsys 1010系统浏览 Elecsys 1010系统浏览 标准品和质控 试剂和条码 二点定标 二点定标 二点标准品 ECL流动比色池 Elecsys的弱点 流动读数池—高携带率 PMT和电极—寿命短(10万次),费用高 磁性颗粒—比重比水重,试剂不均匀 冲洗方式—表面被动冲洗,如酶标板,有残留 蒸溜水探针清洗—高携带率 试剂混匀—搅拌棒,有携带 一次清洗—Hook效应 质控—只控制低值或中值区域 链霉亲和素-生物素包被技术—增加对样品的要求 Elecsys的干扰 AxSYM与Elecsys主要性能比较 AxSYM与Elecsys主要性能比较 AxSYM与Elecsys主要性能比较 雅培与罗氏肝炎试剂比较(1) 雅培与罗氏肝炎试剂比较(2) 雅培与罗氏质控品的比较 Roche模块式仪器-免疫E170 生化和免疫组合式仪器 模块包含 控制单元—控制整个系统 D2400—生化,2400T/h,16assays,3500T/瓶 核心单元—放置样品,300支样品/2个架 P800—生化,800T/h,44assays,1200T/瓶 核心单元—回收样品, 300支样品/2个架 E170—免疫,170T/h,25assays,100/200T/盒 ISE900/1800—电解质,钾,钠,氯,900/1800T/h E170的模式图 E170的模式图(轨道) E170模块: 基本特征 E170模块: 工作量 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170系统浏览 E170 ECL技术存在问题 电解产生的光子,通电时结合物仍在电极引发光发射,以及流动比色池的设计引起高背景 这些都会降低检测敏感度(TSH的敏感度比i2000差一个数量级),降低检测速度(2个流动比色池速度只有170测试/小时),对结果产生干扰(FDA官方网站有关E170的甲状腺产生错误结果,肝炎试剂有严重携带率,降低的灵敏度和特异性,HIV试剂无法检测O亚型而被PEI拒绝在欧洲市场使用,肿瘤指标结果不准确, AFP, CEA有严重的Hook效应) E170 – 免疫模块 25 个试剂位,100 / 200 测试包装 ECL技术,IGEN International, Inc.专利, 通用试剂 ,E170, 2010 1010 300 样本上 2 trays,30 架/ 150 管每个 tray, Roche/Hitachi 917 rack, 5 位 速度:170 – 680 test/hr (1 – 4 modules),所有分析 18 min , 除了 B12 和 Folate 27 min. 消耗品:1000 pipette tips ,1000 反应管,至 12 m