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2、按层析的分离机理分类 (1)排阻层析(exclusion chromatography) 利用凝胶层析介质(固定相)交联度的不同所形成的网状孔径的大小,在层析时能阻止比网孔直径大的生物大分子通过。利用流动相中溶质的分子量大小差异而进行分离的一种方法,称之为排阻层析。 (2)离子交换层析(ion exchange chromatography) 利用固定相球形介质表面活性基团经化学键合方法,将具有交换能力的离子基团在固定相上面,这些离子基团可以与流动相中离子发生可逆性离子交换反应而进行分离的方法,称之为离子交换层析。 (3)吸附层析(absorption chromatography) 利用吸附层析介质表面的活性分子或活性基团,对流动相中不同溶质产生吸附作用,利用其对不同溶质吸附能力的强弱而进行分离的一种方法,称之为吸附层析。 (4)分配层析(partition chromatography) 被分离组分在固定相和流动相中不断发生吸附和解吸附的作用,在移动的过程中物质在两相之间进行分配。利用被分离物质在两相中分配系数的差异而进行分离的一种方法,称之为分配层析。 (5)亲和层析(affinity chromatography) 在固定相载体表面偶联具有特殊亲和作用的配基,这些配基可以与流动相中溶质分子发生可逆的特异性结合而进行分离的一种方法,称之为亲和层析。 (6)金属螯合层析(metal chelating chromatography) 利用固定相载体上偶联的亚胺基乙二酸为配基与二价金属离子发生螯合作用,结合在固定相上,二价金属离子可以与流动相中含有的半胱氨酸、组氨酸、咪唑及其类似物发生特异螯合作用而进行分离的方法,称之为金属螯合层析。 (7)疏水层析(hydrophobic chromatography) 利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离的方法,称之为疏水层析。 (8)反向层析(reverse phase chromatography) 利用固定相载体上偶联的疏水性较强的配基,在一定非极性的溶剂中能够与溶剂中的疏水分子发生作用,以非极性配基为固定相,极性溶剂为流动相来分离不同极性的物质的方法,称之为反相层析。 (9)聚焦层析(focusing chromatography) 利用固定相载体上偶联的载体两性电解质分子,在层析过程中所形成的pH梯度,并与流动相中不同等电点的分子发生聚焦反应进行分离的方法,称之为聚焦层析。 (10)灌注层析(perfusion chromatography) 利用刚性较强的层析介质颗粒中具有的不同大小贯穿孔与流动相中溶质分子分子量的差异进行分离的方法,称之为灌注层析。 Thank you for your join * * * 问题: 1、珍珠港事件 ---- 蛋白流失,感染 2、急性肾炎 ---- 蛋白流失 * 乙醇的渗透蒸发分离,选用带-COOH的膜,有利于分离除水(H2O与-COOH形成氢键) 第七章 色谱 In 1903,俄国植物学家Michael Tsweett’s Work(see Ber. Deut. Botan. Ges., 1906; 24: 384). Chromatography = (chromatus = color, graphein = to write). A、图形包含的意义 B、分离机制 C、柱效 D、分离度 纸层析 第一节 色谱学基础 1、一般过程 2、分类 3、名词术语 4、理论 4.1、塔板理论 4.2、速率理论 4.3、分离度 4.4、定性分析 4.5、定量分析 4.6、定量方法 5 应用: 违禁药物分析 丁卡因 N-烯丙基原吗啡 概念与原理 层析:根据混合物中,溶质在互不相溶的两相之间分配行为的差别,引起移动速度的不同而进行分离的方法。 原理:互不相溶的两相分别称为固定相和流动相,固定相填充与柱中,在一端(入口)加入一定量的料液后,连续输入流动相,料液中的溶质在流动相和固定相之间发生扩散传质,产生分配平衡。 分配系数m大的溶质在固定相上存在的几率大,随流动相移动的速度小。这样,溶质之间由于移动速度的不同而得到分离,在层析柱出口处各个溶质的浓度变化如前图所示。 1 色谱一般过程 组件及过程: A 色谱柱(column): B 固定相(stationary phase):
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