硒硫,小鼠脑教案分析.pptVIP

硒、硫对雄性小白鼠脑组织的影响 主要内容 选题的背景和意义 实验材料与处理 实验方法 实验结果 结论与讨论 近年来一些研究表明，脑组织中少突胶质细胞的发育成熟阶段，离不开硒元素的作用。通过 Northern blot analysis 技术发现硒对磷脂蛋白、碱性蛋白和髓鞘相关糖蛋白的基因表达有上调作用。在对硒碘处理后的神经细胞增殖密度、大脑皮质和板层厚度神经元的树突分枝等指标的检测中，可得出锥体细胞的基树突及主干树突分枝、星形细胞的树突分支明显增长，说明一定浓度的硒促进脑细胞增殖发育。 另一些研究显示硒促进脑神经细胞DNA的合成，并且硒可抵消汞、氟对细胞增殖发育的抑制作用。 此外分子水平研究显示，硒能够降低汞污染粮食诱导的大鼠脑神经系统c-los mRNA表达和c-los蛋白表达，证实了硒对于汞神经毒性的拮抗作用。 虽然硒对人类正常生命活动、生长发育、生理生化反应的调节具有深远意义，但是摄入硒的含量超出或低于正常范围时，也会给人造成一定威胁。在人体生长发育阶段摄入硒含量过低，硒元素缺失，会引起克山病和大骨节病等疾病。其次，硒又具有一定毒性，当摄入的硒含量超标时，会引起人体机能的损伤。如亚硒酸钠是一种具有剧毒性的白色晶体，虽然它可以合成有机体所需要的含硒的生物活性物质，但不能提高有机体内硒的存储水平，而且 亚硒酸钠摄入过量会引起硒中毒，导致神经系统严重受损。 因此本实验进行了硒硫拮抗作用与脑组织（神经系统）的相关关系的研究，这对人体脑组织生长发育具有重大影响和研究意义。 实验材料 本实验选取的动物是雄性昆明鼠 材料处理 挑选48只体态正常，体重接近，健康状况良好的小白鼠随机分为6组，每组8只。试验周期45天，先进行为期两周的预饲养，正式试验期为30天。在预饲期测量出小鼠的平均日粮为6.5g，平均饮水量为7.5ml。进入正式试验后，每日通过饮水添加适量硫酸钠和不同浓度的亚硒酸钠。硫酸钠添加量是日粮的0.2%，亚硒酸钠的添加量分别是0mg/Kg、0.2mg/Kg、0.5mg/Kg、1mg/Kg、2mg/Kg、4mg/Kg。经日粮与饮水换算后分组情况见表1. 1 2 3 4 5 6 硫酸钠 日粮的0.2% 亚硒酸钠（mg/kg） 0 0.2 0.5 1 2 4 表1实验分组表 （1）样品采集与处理 （2）样品固定 （3）石蜡包埋 （4）组织学染色 （5）细胞凋亡染色 （6）图像分析与数据处理 （1）样品采集与处理 饲养结束后，将小鼠按照组别进行解剖，每组5只，共6组。每组取2只脑组织清洗并进行固定，其余按组分带包装放于、-40℃冰箱中保存。 （2）样品固定 将同组不同脑组织分别浸泡于4%的中型多聚甲醛溶液，时间为24h至72h。 （3）石蜡包埋 a 预处理：将固定好的脑组织进行修整 b 脱水：用以下梯度处理组织块 c 乙醇75%（2小时）→85（2小时）→95%（1小时）→95%（1小时）→100%（45分钟）→无水乙醇和二甲苯（1：1）浸泡20分钟。 d 透明：二甲苯（45分钟）—二甲苯（45分钟）。 e 浸蜡：浸蜡3小时，工作台和蜡锅的温度范围控制在60℃~65℃。 f 组织包埋：用纸叠成无盖的长方体盒子，脑组织平均分开放于盒底并记好顺序，将蜡缓慢的灌于盒中，在室温下放在平整的地方至完全凝固。 （4）组织学染色 二甲苯Ⅰ5分钟、二甲苯Ⅱ5分钟脱蜡→梯度酒精100%Ⅱ、100%Ⅰ、95%各2分钟，90%、80%、70%各1分钟下行至水→蒸馏水浸泡2分钟→滴加苏木素染液静置10~15分钟，蒸馏水冲洗→1%盐酸酒精脱色1分钟，冲洗蓝化→伊红染色复染2~5分钟，蒸馏水冲去复色→梯度酒精70%、80%、90%各1分钟，95%、100%Ⅰ、100%Ⅱ各2分钟→二甲苯Ⅰ5分钟，二甲苯5分钟透明→中性树脂封片。 （5）细胞凋亡染色 a 切片脱蜡至水 二甲苯Ⅰ5分钟、二甲苯Ⅱ5分钟脱蜡→梯度酒精100%Ⅱ、100%Ⅰ、95%各2分钟，90%、80%、70%各1分钟下行至水→蒸馏水浸泡2分钟 b 滴加3%H2O2，室温静置10分钟对内源性酶进行灭活，蒸馏水洗3次，每次2分钟。 c 配制0.01MTBS1:200新鲜稀释Proteinse K ，滴加Pro K,37℃消化15min，0.01MTBS洗3次，每次2分钟。 d 滴加标记缓冲液，每片20微升。 e 每片取TdT与DIG-d-UTP各1微升加入18微升的标记缓冲液中混匀，滴加到组织上，置于湿盒，37℃标记2小时。 f