第十章DNA的合成与修复解决方案.pptVIP

中心法则： 几个基本概念： 一、DNA的半保留复制 DNA聚合酶Ⅲ全酶的亚基组成 (三）DNA连接酶：连接DNA双链中的单链切口 (四)与DNA合成有关的其它蛋白因子(大肠杆菌中) 真核细胞内有五种DNA聚合酶 核苷酸切除修复（2） （四）直接修复（1） 直接修复（2） Pol C ≥10 830,000 ＋ － 15,000-60,000 ≥500,000 复制 Pol B ≥7 88,000 ＋ － 2,400 1,500 修复 Pol A 1 103,000 ＋ ＋ 1,000-1,200 3-200 切除引物，修复 结构基因＊ 不同种类的亚基数目 相对分子质量 3’→5’外切酶5’→3’外切酶 聚合速度（核苷酸/分） 持续合成能力 功能 DNA聚合酶Ⅲ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅰ 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 作用特点： 大肠杆菌和其它细菌的DNA连接酶要求NAD+提供能量；在高等生物和噬菌体中，则要求ATP提供能量。T4噬菌体的DNA连接酶不仅能连接双链DNA上的粘性切口，而且能连接无粘性末端的平头双链DNA。 DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用。 DNA连接酶作用机理 50 300 100 300 400 65 74 60 109 引入或松开超螺旋 使双链DNA 解链 稳定单链区 合成RNA引物 除去引物并填满缺口 DNA旋转酶（或拓扑异构酶） DNA解链酶 单链结合蛋白 引物合成酶 DNA聚合酶Ⅰ 分子/细胞 相对分子量（×103） 功能 蛋白质 1、拓扑异构酶 拓扑异构酶：催化DNA的拓扑连环数发生变化的酶，在DNA重组修复和其它转变方面起重要作用。 除连环数不同外其它性质均相同的DNA分子称为拓扑异构体，引起拓扑异构体反应的酶称为拓扑异构酶。 拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接。作用是松解负超螺旋，反应不需要能量。主要集中在活性转录区，同转录有关。 拓扑异构酶Π：使DNA两条链发生断裂和再连接。当引入负超螺旋时需要由ATP提供能量，同复制有关。 两类拓扑异构酶作用特点: 二者共同控制DNA的拓扑结构。 2、解螺旋酶 （解链酶） 通过水解ATP将DNA两条链打开。E.coli中的rep蛋白就是解螺旋酶，还有解螺旋酶I、II、III。每解开一对碱基需要水解2个ATP分子。 引发体可以沿模板链5’ ? 3’方向移动,具有识别合成起始位点的功能，移动到一定位置上即可引发RNA引物的合成。移动和引发均需要ATP提供能量， n’蛋白具有ATP酶的活力。引发体的移动与复制叉移动的方向相同，与冈崎片段的合成方向相反。 3、引物合成酶与引发前体 引物合成酶：催化引物RNA的生成 引发前体:它由多种蛋白质dnaA、dnaB、dnaC、n、n’、n’’和i组成。引发前体再与引发酶结合组装成引发体。 稳定DNA解开的单链，防止复性和保护单链部分不被核酸酶水解。 4、单链结合蛋白： （五）、参与DNA复制的酶与蛋白因子总览图 五、 DNA的复制过程：（以大肠杆菌为例） 复制的终止： 复制的起始 1、起始复合物的形成：称为引发 2、RNA引物的合成 链的延伸： 复制原点oriC和原点的识别： 从复制原点到终点，组成一个复制单位，叫复制子（基因组独立进行复制的单位）。 DNA的复制有特定的起始位点，叫做复制原点。常用ori C(或o）表示。大肠杆菌的复制原点ori C由245个bp构成，含两组保守的重复序列：三个13bp的序列（富含A、T的序列）和四个9bp的序列；许多生物的复制原点也都是富含A、T的区段。 复制原点由DnaA蛋白识别， 在原点由DnaB蛋白（解螺旋酶）将双螺旋解开成单链状态，分别作为模板，合成其互补链(DNA双链的解开还需DNA拓扑异构酶Π 、 SSB),在原点处形成一个眼状结构，叫复制眼。 （一）复制起始 1、拓扑异构酶解开超螺旋。 2、Dna A蛋白识别并在ATP存在下结合于四个9bp的重复序列。 3、在类组蛋白（HU、ATP参与下, Dan A蛋白变性13个bp的重复序列,形成开链复合物。 4 、Dna B借助于水解ATP产生的能量在Dna C的帮助下沿5’ →3’ 方向移动，解开DNA双链，形成前引发复合物。 5、单链结合蛋白结合于单链。 6、引物合成酶（Dna G蛋白）开始合成RNA引物。 (二) 链的延长（冈崎片段的合成） 真核生物的冈崎片段为：100-200bp 原核生物的冈崎片段为：1000-2000bp DNA链的延伸 在DNA聚合酶Ш的催化下，以四种5’ -脱氧核苷三磷酸为底物，在RNA引物的3’端以磷酸二酯键连接上脱氧核糖核苷酸并释放出焦磷酸。DNA链的延伸同时