第7章基因操作技术要点分析.pptVIP

第七章 基因操作技术 第一节 DNA 克隆 第二节 质粒 DNA 制备 第三节 限制性内切酶及酶切片段电泳 第四节 DNA片段连接, 转化与重组 DNA和蛋白质是细胞中最重要的生物大分子. 细胞中蛋白质种类繁多,但大多数含量稀少,难以分离提取和进行分析. 基因是编码蛋白质的 DNA 区段, DNA在同一个体的不同细胞中都是相同的, 容易分离提取和纯化. 所以, 对DNA 的研究能提供大量有关蛋白质的结构与功能的信息 (可从碱基序列推导出氨基酸序列，模拟蛋白质的结构与功能，或进行体外基因表达获得相应的蛋白质). 基因操作包括一系列的技术和程序: DNA分离提取、DNA克隆、DNA重组和DNA转化. 需要载体、宿主细胞、和工具酶等. 第一节 DNA 克隆 1 DNA 克隆 克隆是指遗传上同一的生物体群体或由无性繁殖所产生的无性繁殖系(如株系, 细胞系, 菌株) DNA克隆是指含有相同DNA分子或DNA片段的的细胞群体. 通过分离基因组DNA, 扩增某个特定DNA片段, 转化到受体细胞中增殖，可制备出一个特定DNA克隆. DNA制备是DNA克隆及其他DNA操作的第一步骤. DNA克隆的基本程序如下: DNA提取 → 分离和扩增特定DNA片段(PCR) 载体连接 ↓ ↓ 重组体DNA ↓转化宿主细胞 ↓ 细胞培养(细胞克隆) 克隆筛查↓(分子杂交) ↓ 靶DNA克隆 ↓ 表达分析与功能分析 1.1 DNA 制备 (提取) 组织细胞 ---→研磨破细胞 ---→ 萃取 ↓ ↓ 离心 ↓ 分离 ↓ 纯化 ↓ DNA 样品 1.3 转化 转化是把外源DNA（重组体DNA）转移到宿主细胞中复制的过程。 靶DNA