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超离心 根据物质的沉降系数、质量和形状不同,应用强大的离心力,将混合物中各组分分离、弄素、提纯的方法 是现代生物技术领域研究中不可缺少的实验室分析和制备手段 思考题 1 发酵液为何需要预处理?处理方法有 哪些?2 如何使用助滤剂?3 凝集与絮凝过程有何区别?如何将两 者结合使用?4 错流微滤与传统过滤相比有何优点? 5 人有了知识,就会具备各种分析能力, 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书,广泛阅读, 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍,我们能丰富知识, 培养逻辑思维能力; 通过阅读文学作品,我们能提高文学鉴赏水平, 培养文学情趣; 通过阅读报刊,我们能增长见识,扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操, 给我们巨大的精神力量, 鼓舞我们前进。 * 2 发酵液的预处理和固液分离 2.1 悬浮液的预处理 悬浮液的基本特性 ①细胞的相对密度与培养液相似 ②可压缩性,粘稠,非牛顿流体,流变学复杂 ③悬浮状态稳定 预处理目的 a 改变发酵液物理性质 b 产物转入液相中 c 除去发酵液中部分杂质 预处理方法 高价无机离子的去除 Ca2+ 草酸 Mg2+ 三聚磷酸钠 Fe3+ 黄血盐 (普鲁士蓝) 蛋白质去除 加热 调pH (草酸,无机酸或碱) 有机溶剂 蛋白沉淀剂 凝聚与絮凝 凝聚:胶体粒子(10-100nm)中性盐促进下脱稳相互聚集成大粒子(1mm)机理:a 中和粒子表面电荷 b 消除双电层结构絮凝:大分子聚电解质将胶体粒子交联成网状,成形絮凝团的过程机理:架桥作用 絮凝剂应用优化 a 用量控制 最佳用量为粒子表面积约有一 半被 聚合物覆盖时所用的絮凝剂量。 b pH 控制 c 固体浓度与粒子尺寸分布d 电解质含量e 后续工艺要求 常用的凝聚剂与絮凝剂 凝集剂:铝盐,铁盐,钙盐,锌盐絮凝剂:阳离子型:阳离子聚丙烯酰胺,聚丙烯酸二烷基胺乙酯,聚二烯丙基四胺盐。阴离子型:聚丙烯酸钠,聚苯乙烯磺酸,木质素磺酸盐非离子型:聚氧乙烯天然类:甲壳素 2.2 发酵液过滤法 滤饼比阻:单位滤饼厚度的阻力 达西定律 影响过滤的因素 菌种:真菌,放线菌,细菌 培养基:黄豆,花生,淀粉,后期加油,培养基未用完 发酵时间:菌丝自溶前放罐 改善过滤方法 助滤剂:质地坚硬不可压缩性固体机理:表面吸附胶体及不可压缩型格子结构使用方法:a 预先制成滤饼b 助滤剂混入悬浮液中一起过滤常用助滤剂:硅藻土,珍珠岩,活性炭应用优化因素 a 单位质量助滤剂的滤液最大产量 b 使用周期 c 流速 固液分离设备 板框 鼓式真空过滤机 错流过滤 离心机 Figure The basic design of the rotary vacuum filter. The suspension is sucked through a filter cloth on a rotating drum. This produces a filter cake which is removed with a blade. The filter cake may be rinsed during its rotation. These filters are generally rather messy and difficult to contain making them generally unsuitable for use in the production of toxic or recombinant DNA products. 真空过滤器 错流过滤 Figure Principles of (a) dead-end filtration and (b) cross-flow filtration. In dead-end filtration the flow causes the build-up of the filter cake, which may prevent efficient operation. This is avoided in cross-flow filtration where the flow sweeps the membrane surface clean. 特点 a介质阻力大b 不能得到干滤饼 c 需要大的膜面积 d 收率高 (97-98%)e 质量好f 减少处理步聚g 染菌罐也能进行处理 离心沉降 离心过滤 离心分离和超离心 离心沉降的原理 浮力 Fg 粘滞力Ff 分离因数Fτ 离心沉降的计算 离心沉降的设备 平抛式 管式 多室 蝶式 螺旋式 (a) Tubular bowl cent
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