分子生物学第一章绪论资料.pptVIP

* * * * * * * * * * Wilkins通过对DNA分子的X射线衍射研究证实了该模型。 Rosalind E. Franklin 1920-1958 被遗忘的英格兰玫瑰 Rosalind E. Franklin 1920-1958 在发现DNA双螺旋结构同时，Watson和Crick就提出DNA复制的可能模型。 其后在1956年A.Kornbery首先发现DNA聚合酶； 1958年Meselson及Stahl用同位素标记和超速离心分离实验为DNA半保留模型提出了证明； 1968年Okazaki（冈畸）提出DNA不连续复制模型； 1972年证实了DNA复制开始需要RNA作为引物； 70年代初获得DNA拓扑异构酶，并对真核DNA聚合酶特性做了分析研究。 完善了对DNA复制机理的认识 3、中心法则和操纵子学说的提出 以Nireberg等为代表的一批科学家经过艰苦的努力，确定了遗传信息以密码方式传递，每三个核苷酸组成一个密码子，代表一个氨基酸，到1966年，全部破译了64个密码子，并提出了遗传信息传递的“中心法则”。 在研究DNA复制将遗传信息传给子代的同时，提出了RNA在遗传信息传到蛋白质过程中起着中介作用的假说。 1958年Weiss及Hurwitz等发现依赖于DNA的RNA聚合酶； 1961年Hall和Spiegelman用RNA-DNA杂交证明mRNA与DNA序列互补；逐步阐明了RNA转录合成的机理。 1968年，Nirenberg，Holley和Khorana共享诺贝尔生理医学奖 Nirenberg：破译DNA遗传密码； Holley：阐明了酵母丙氨酸tRNA的核苷酸序列，并证实了所有tRNA具有结构上的相似性； Khorana：第一个合成了核酸分子，并且人工复制了酵母基因。 中心法则Crick于1954年所提出的遗传信息传递规律 1954年首次 提出的“中心法则” 1970-1980年 的“中心法则” 21世纪后修正的“中心法则” 1961年，法国科学家Jacob和Monod提出并证实了操纵子（operon）作为调节细菌细胞代谢的分子机制。 他们还推测存在一种与DNA序列相互补、能将它所编码的遗传信息带到蛋白质合成场所并翻译产生蛋白质的mRNA（信使核糖核酸）。 对分子生物学的发展产生了极其重要的 指导作用。 Francois Jacob (Left), Jacques Monod (Center) Andre Lwoff (Right),1965分享了诺贝尔生理医学奖 三、初步认识生命本质并开始改造生命的深入发展阶段 工具酶的发现和应用 1970年Smith等分离并纯化了限制性核酸内切酶Hind II；1972年，H.W.Boyer等相继发现了EcoR I 一类重要的限制性内切酶。 1967年，世界上有五个实验室几乎同时发现DNA连接酶，特别是1970年H.G.Khorana等发现的T4 DNA连接酶具有更高的连接活性。 1970年，Baltimore等和Temin等在RNA肿瘤病毒中各自发现了反转录酶，完善了中心法则，用于构建cDNA 文库。 1.重组DNA技术的建立和发展 1970年Smith等分离并纯化了限制性核酸内切酶Hind II；1972年，H.W.Boyer等相继发现了EcoR I 一类重要的限制性内切酶。 1967年，世界上有五个实验室几乎同时发现DNA连接酶，特别是1970年H.G.Khorana等发现的T4 DNA连接酶具有更高的连接活性。 1970年，Baltimore等和Temin等在RNA肿瘤病毒中各自发现了反转录酶。 载体的发现及其应用 载体主要是小分子量的复制子如：病毒、噬菌体、质粒。 1972年，美国Stanford大学的P. Berg 等首次成功地实现了DNA的体外重组； pSC101质粒载体， ColE1质粒载体， pBR322质粒载体， pUC质粒载体， pGEM-3Z质粒，穿梭质粒载体， pBluescript噬菌粒载体etc. 在多克隆位点区（MCS）的两侧，存在一对T3和T7噬菌体的启动子，用以定向指导插入在多克隆位点上的外源基因的转录活动； 具有单链噬菌体M13或f1的复制起点和一个来自ColE1质粒的复制起点，保证pBluescript噬菌粒载体在有或无辅助噬菌体共感染的不同情况下，按照不同的复制形式分别合成出单链或双链DNA； 编码有一个氨苄青霉素抗性基因，作为转化子克隆的选择标记； 含有一个lacZ基因，可以按照X-gal-IPTG组织化学显色法筛选噬菌粒载体的重组子。 LacZ编码β-半乳糖苷酶氨基端146个氨基酸的α-肽， IPTG（异丙基- β-D-硫代半乳糖苷）诱导该基因表达，合成的β-半乳糖苷酶α-肽能与宿主细胞所编码