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* 4．最适温度变化 一般与游离酶差不多，但有些会有较明显的变化。 5．底物特异性变化 作用于低分子底物的酶 特异性没有明显变化 既可作用于低分子底物又可作用于大分子低物的酶 特异性往往会变化。 * 6．米氏常数Km的变化Km值随载体性质变化 （1） 载体与底物带相同电荷，Km’Km固定化酶降低了酶的亲和力。 （2） 载体与底物电荷相反，静电作用，KmKm * 六、固定化酶（细胞）的应用 1. 固定化酶（细胞）在工农业生产上的应用 2． 固定化酶在医药治疗上的应用 3． 固定化酶在分析化学中应用 4． 固定化酶和亲和色谱 5． 固定化酶与环境保护 6． 新能源开发中的应用 7． 固定化酶在基础理论研究中应用 * 1．固定化酶（细胞）在工农业生产上的应用 葡萄糖异构酶——世界上生产规模最大的一种固定化酶。 利用固定化乳糖酶可以连续生产低乳糖奶 固定化酵母细胞等微生物可用于生产各种酒类 热点：固定化原生质体的应用 * 2． 固定化酶在医药治疗上的应用 例1 固定化青霉素酰化酶，只要改变pH值等条件，就可以生成不同的产物。 * 青霉素酰化酶催化合成头孢类抗生素 7-ACA as nucleus * 青霉素酰化酶催化合成头孢类抗生素 7-ACCA or 7-ADCA as nucleus * 例2：制造人工肾 利用固定化脲酶透析液和活性炭一起制成的体外循环装置，大大提高了疗效。 * 3．固定化酶在分析化学中应用 酶柱和酶管，可与分光光度计、荧光计或电量计结合，形成酶电极，进行某些物质的自动分析。 * 酶电极 * 酶电极 特点：快速、方便、灵敏、精确 范围：糖类、抗生素、氨基酸、甾体化合物、有机酸、脂粉、醇类、胺类以及尿素、尿酸、硝酸、磷酸等 要求：酶必须有较强的专一性，并且要有一定的纯度。 * 4．固定化酶和亲和色谱 亲和技术的基础：是生物活性化合物生物特异信息的综合。 利用了生命现象中生物分子间特有的高亲和力、高专一性，可逆结合而设计的纯化方法。 是唯一能够体现待分离物质间生物学功能差异的分离方法。 * 5． 固定化酶与环境保护 一、环境监测 二、污染物处理 * 6．新能源开发中的应用 H2是重要的能源物质，虽然有许多微生物可以产生H2，但产氢系统不稳定。有人利用固定化丁酸梭菌连续产氢，稳定性比天然细胞好。 将植物的叶绿体中的铁氧还原蛋白氧化酶系统用胶原膜包被，可用于水的光介产生氢气和氧气。 * 7．固定化酶在基础理论研究中应用 阐明酶反应机理 揭示酶原激活机理 * 酶亚基性质的研究 * 研究蛋白质-核酸分子结构 连续的固定化酶柱进行DNA序列分析； 原理：是测定DNA聚合时，以掺入dNTP同时释放的焦磷酸判断是否发生了聚合反应，进而确定掺入的是哪种核苷酸从而推导出序列； ——该系统由连续的6个固定化酶柱组成 焦磷酸酶、DNA聚合酶、甘油激酶、己糖激酶、ATP磷酸化酶，荧光酶柱。 * 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * 一、什么是固定化酶？ 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性酶 （固定化酶） 固定化技术 第二章 固定化酶 * 二、固定化酶的特点 优点： 不溶于水，易于与产物分离； 可反复使用； 可装塔连续化生产； 稳定性好。 缺点： -固定化过程中往往会引起酶的失活 -首次投入成本高 -大分子底物较困难 * （一） 吸附法 （二） 结合法 （三） 交联法 （四） 包埋法 三、固定化酶的方法 * （一） 吸附法 物理吸附：利用各种固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上。 选择载体的原则: - 要有巨大的比表面积 - 要有活泼的表面 - 便于装柱进行连续反应 物理吸附法: -静止法 -电沉积法 -反应器上直接吸附法 -混合浴或振荡浴吸附法 * 优点： 固定化时酶分子的构象很少 或基本不发生变化。 缺点： 结合力弱，易解吸附。 载体： 纤维素、琼脂糖、活性炭、 沸石及硅胶等。 * （二）结合法 1 离子键结合法 2 共价键结合法 * 1 离子键结合法 酶分子 含有离子交换基团的固相载体 第一个离子结合法固定化酶： DEAE — Cellulose 固定化过氧化氢酶 第一个工业化的固定化酶： DEAE-Sephadex A-50 固定化氨基酰化酶 常用载体:DEAE-纤维素，