核酸化学(汉班)-资料.pptVIP

1.5 核酸的某些理化性质及 核酸研究常用技术 一、 核酸的紫外吸收特性（λmax=260nm） 二、 核酸的变性、复性和分子杂交 三、核酸的熔解温度（Tm） 220 240 260 280 0.1 0.2 0.3 0.4 波长（nm） 光吸收 1 2 3 天然DNA 核苷酸总吸收值 变性DNA 一、 核酸的紫外吸收特性（λmax=260nm） 纯DNA OD260/OD280=1.8 纯RNA OD260/OD280=2.0 DNA的变性过程 加热 部分双螺旋解开 无规则线团 链内碱基配对 二、核酸的变性 变性：在物理、化学因素影响下， DNA碱基对间的氢键断裂，双螺旋解开， DNA的功能丧失。如高温、pH值、变性剂(尿素、甲醛)等。 增色效应： DNA变性过程中，伴有A260增加的现象 DNA的热变性和解链温度（Tm） 用加热的方法使DNA变性叫做热变性。 DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。 熔解温度：通常将DNA的变性达到50%时，即增色效应达到一半时的温度称为DNA的熔解温度,Tm也称解链温度或DNA的熔点。 一般DNA的Tm值 在70-85?C之间 温度/0C A260 0.02 0.1 1.0 mol/LKCl Tm值的影响因素： 　　Tm值不是一个固定值，它与很多因素有关： DNA的碱基比例：G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G、 C含量，可通过经验公式计算： （G+C)%=(Tm-69.3)X2.44 　 介质中的pH值、离子强度：随着离子强度上升， Tm值增大。在10-3mol/L的离子强度以下，无需加热，溶于其中的DNA将出现不可逆变性。 DNA的均一性：均一病毒DNA解链发生在很窄的范围内，而动物细胞DNA较宽。 复性：变性的DNA在适当条件下，两条彼此分开的单链重新缔合成为双螺旋结构的过程。 减色效应：变性DNA复性过程中，伴有A260减小的现象。 三、核酸的复性 变性（加热） 退火（缓慢冷却） 影响DNA复性速度的因素： DNA的顺序：简单序列的比顺序复杂的DNA复性快。 DNA的浓度：浓度高，碰撞机会增加，复性快。 DNA片段大小：大的分子动动慢，复性慢。 温度：在低温20-50℃时，不相干的DNA也聚集在一起。温度适中，则复性双螺旋较稳定。最佳复性温度为Tm－25 ℃左右。一般为60 ℃。 溶液的离子强度：离子浓度高，可中和DNA分子磷酸基团上的负电荷，使复性加快。 分子杂交：不同来源的DNA单链间或单链DNA与RNA之间存在碱基配对区域，复性时形成杂交分子的现象。 四、核酸的分子杂交 问答题 1、某DNA样品含腺嘌呤15.1%（按摩尔碱基计），计算其余碱基的百分含量。 2、DNA双螺旋结构是什么时候，由谁提出来的？试述DNA双螺旋结构的基本特点？ 3、tRNA的结构有何特点？ 4、DNA和RNA的结构有何异同？ 5、计算（1）分子量为3?105的双股DNA分子的长度；（2）这种DNA一分子占有的体积；（3）这种DNA一分子占有的螺旋圈数。（一个互补的脱氧核苷酸残基对的平均分子量为618） ? 名词解释 变性和复姓　　分子杂交 增色效应和减色效应 Tm　　 Chargaff定律 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * DNA双螺旋结构发现者克里克去世NEWS.SOHU.COM　　2004年07月30日16:38　　来源：京报网-北京晚报 页面功能??【我来说两句】【我要“揪”错】【推荐】【字体：大?中?小】【打印】?【关闭】?　　携带生物遗传物质的DNA分子的双螺旋结构发现者之一、诺贝尔奖得主弗朗西斯·克里克，因患癌症7月28日晚间在美国圣迪戈加利福尼亚大学医院去世，享年88岁。　　1953年，正在剑桥大学的弗朗西斯·克里克，与在那里进行博士后研究的美国人沃森以及他们另外一个同事毛里斯·威尔金斯一起，发现了DNA分子的双螺旋结构，从而为迄今为止持续50年 的生物科学