酶学实验技术资料.ppt

（1）载体结合法 ②离子结合法： 载体：多糖类离子交换剂和离子交换树脂， 如DEAE-纤维素等。 缺点：结合力也比较弱，酶易脱落 （1）载体结合法 原理：酶分子上的功能团，如氨基、羧基、羟基、咪唑基、巯基等和载体表面的反应基团之间形成共价键，因而将酶固定在载体上。 ③共价结合法： 优点：酶与载体结合牢固，不会轻易脱落。 缺点：反应条件剧烈，往往不能得到比活性高的固定化酶，甚至酶的专一性等性质也会发生变化。 （2）交联法 原理：用双功能或多功能试剂使酶与酶或微生物 的细胞与细胞之间交联的固定化方法。 常用的交联剂有戊二醛等。 缺点：反应条件强烈，固定化酶的酶活较低； 优点：酶的稳定性提高。 最常用的交联剂是戊二醛，它的二个醛基与酶分子的游离氨基反应形成schiff碱，彼此交联： —CH=N-酶-N=CH-(CH2)3-CH=N-酶=N=CH- 交联方式 N CH (CH2)3 CH N N CH (CH2)3 CH N —CH=N-酶-N=CH-(CH2)3-CH=N-酶-N=CH- 交联法 常与吸附法或包埋法联合使用。如先使用明胶（蛋白质）包埋，再用戊二醛交联； 常在被交联的酶溶液中添加一定量的辅助蛋白如牛血清白蛋白，以提高固定化酶的稳定性。 （3）包埋法 网格型、微囊型 网格型中用的高分子有聚丙烯酰胺、聚乙烯醇和光敏树脂等合成高分子和淀粉、明胶、胶原、海藻胶和角叉菜胶等天然高分子。网格型包埋法是固定化细胞中用得最多、最有效的方法。 2、固定化酶的性质 一般酶活力下降，可在固定化反应体系中加入 抑制剂、底物或产物以保护酶的活性中心。 （1）酶活力的变化 （2）酶稳定性的变化 ①操作稳定性，半衰期在1个月以上，可以认为 其具有一定的工业应用价值； ②贮藏稳定性； ③对蛋白酶的稳定性。 ④热稳定性 （3）酶学特性的变化 底物专一性、 最适pH、 最适温度、 米氏常数 最大反应速度等，均可能发生变化。 填充床反应器 第五节 酶在医药工业中的应用 一、固定化细胞法生产6-氨基青霉烷酸 技术路线 E.coli 斜面 固定化细胞（颗粒状） 青霉素G 转化液 滤液 细胞 6-APA 培养 明胶包埋-戊二醛交联 过滤 抽提 填充床式反应器 二、固定化酶法生产L-氨基酸 营养、药物、增味剂等； 技术路线 DL-氨基酸 氨基酰化酶 水解 N-乙酰-D-氨基酸 N-乙酰-DL-氨基酸 L-氨基酸 乙酰化 消旋 氨基酰化酶：离子交换法，DEAE-葡聚糖载体， 填充床反应器 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 酶学实验技术 第一节 概述 第二节 酶的来源和生产 第三节 酶和细胞的固定化 第四节 酶的应用 第一节 概述 一、酶的特性 酶：有催化能力的蛋白质 酶促反应（酶催化反应） 独特特点：①催化效率高；②专一性强；③反应条件温和；④酶的催化活性受到调节和控制。 酶催化反应的特点： 一般特点：①能加快反应速度；②降低反应活化能；③不改变反应的平衡点；④反应前后数量和性质不变 1961年按酶所催化的反应类型将酶分成6大类： ①氧化还原酶类； ②转移酶类； ③ 水解酶类； ④裂合酶类； ⑤异构酶类； ⑥合成酶（或称连接酶）类。 二、酶学实验技术简介 ④有机相中酶反应的研究； ①酶的分离、提纯、大批量生产及新酶和酶的 应用开发； ②酶和细胞的固定化及酶反应器的研究 （包括酶传感器、反应检测等）； ③酶生产中基因工程技术的应用及遗传修饰酶（突变酶）的研究； ⑦模拟酶、合成酶及酶分子的人工设计、合成的研究。 二、酶学实验技术简介 ⑤酶的抑制剂、激活剂的开发及应用研究； ⑥抗体酶、核酸酶的研究； 第二节 酶的来源和生产 利用微生物生产酶的优点是： 一、酶的来源：主要是动植物和微生物 ③微生物具有较强的适应性，通过各种遗传变异的手段， 能培育出新的高产菌株。 ②微生物繁殖快、生产周期短、培养简便，并可以通过 控制培养条件来提高酶的产量； ①微生物种类繁多，动植物体内存在的酶，几乎都 可从微生物中得到； 二、酶的生产菌 1、对菌种的要求： （4）能利用廉价的原料，发酵周期短，易于培养。 （3）稳定，不易产生