高效转化突变型枯草芽孢杆菌IA857方法的研究(牛福星)技术报告.docVIP

枯草芽孢杆菌突变转化方法的研究mutant bacillus subtilis IA857 牛福星1，2，于晶晶1，2，汤宏赤1，2，刘金平1，2，滕 昆1，2，韦宇拓1，2* * NIU Fu-xing1，2，YU Jing-jing1，2，TANG Hong-chi1，2，LIU Jin-ping1，2，TENG Kun1，2，WEI Yu-tuo1，2 （1.广西大学生命科学与技术学院，广西南宁 530005；2.亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广西南宁 530005） （1.College of Science and Technology，Guangxi University，Nanning，Guangxi，530005，China；2. State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-bioresources，Nanning, Guangxi，530005，China） 摘要：【目的】研究比较枯草芽孢杆菌突变株IA857高效转化的最优方法。【方法】以质粒pHCMC04（大小为8089 bp）转化突变型枯草芽孢杆菌IA857，分别用电转化法、原生质体法、电击法诱导的原生质体法、spizizen 低盐环境感受态转化法（简称S法）、低盐环境形成饥饿感受态法及其改良方案在其它突变菌株的试验方法（简称C法）进行实验，通过比较优化得出最优转化方法。【结果】采用S法转化枯草芽孢杆菌突变株IA857，质粒加入量为70 ng时，转化后直接摇床培养1h转化率最高达到1.2×104 CFU/μg DNAB. subtilis IA857, many methods just like electroporation, protoplast method, protoplast by electroporation induced, the low salt environment form hunger feeling state method(short S method) and it’s improved method used in other strains were compared and optimized(short C method).【Result】The method in low salt environment under develop direct table in transformed 1h conversion rate optimization with 70 ng plasmid got a higher transformation efficiency (1.2×104CFU/μg DNA), and this method will be the finally method for Subsequent experiments.【Conclusion】The optimal transformation method and puts forward the basic framework of transformation of Bacillus subtilis. Keywords: B.subtilis, Transformation, Electroporation, protoplast method, low salt environment, competence 收稿日期：2014-02-18 修回日期：2014-03-04 作者简介：牛福星（1988-），男，硕士研究生，主要从事基因工程菌的构建和酶工程方向的研究，Email：nfx516035529@，Tel0771-3270336。 * 广西科学研究与技术开发计划（No3），广西研究生教育创新计划项目资助。 * *通讯作者：韦宇拓（1971-），男，教授，主要从事发酵与酶工程方向的研究，Email：weiyutuo@，Tel0771-3270336。 【研究意义】枯草芽孢杆菌是具有重要工业应用价值的菌种之一，因此建立简便、有效的DNA转化方法，对枯草芽孢杆菌的基因改造、提高其生产性能具有重要意义，因而其高效转化方法依然是个值得研究的方向。电法原生质体法电击法诱导的原生质体转化低盐环境形成饥饿感受态等虽然在不同的菌株中得到报道，但并非所有的菌株都适用。以质粒pHCMC04（8089 bp）突变型枯草芽孢杆菌IA857，对优化pHCMC04均购自BGSC，大肠杆菌DH5ɑ为本实验室保存。 1.3 培养基 1.3.1 电转化法用培养基 据多种电转化培养基配方[1]优化而得，具体为： 溶液A