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氨基酸分析 氨基酸分析可以用自动分析仪进行，氨基酸 分析可分为柱后反应法和柱前反应法两类。 重组蛋白质的浓度测定和分子量测定 蛋白质的浓度测定；紫外法比较方便，又不损耗蛋白质样 品。在未知摩尔消光系数的情况下，可以简单地测定280nm 和260nm光吸收值，然后用公式计算： 蛋白质浓度(mg/ml)=1.55A-0.76A260 用考马斯蓝G-250测蛋白质浓度时，是在酸性条件下使试 剂与蛋白质产生反应，其特征吸收率由465nm转移到595nm ， 在一定蛋白质浓度范围内595nm的吸光度与蛋白质浓度成线形 关系，因此可作为定量依据。 凝胶过滤法是测定蛋白质分子量的最常用的方法，已 广泛使用的是Sephadex系列（G-75，G-100等）和HPLC 凝胶过滤系统。SDS是实验室测定蛋白质分子量的 常规方法。 四. 肽谱分析 肽谱分析是用酶解或化学降解（溴化氰法等）目的蛋 白质后对生成的肽段进行的分解分析，它也是检测目的产 物的指标之一。 蛋白质的二硫键分析 二硫键和巯基与蛋白质的生物活性密切相关，测定巯基的 方法有PMCB法、DTNB法和NEMI法等。基因工程目的产物的 硫-硫键是否正确配对，是一个重要问题，例如IL-2分子中有 Cys-58和Cys-105形成的硫-硫键，而Cys-125是以游离巯基形 式存在，如果发生错误配对，不但生物活性只有原来的1/400 而且会形成抗原性。为此用蛋白质工程法将IL-2的Cys-125改 为Ser或Ala，使其生物活性和热稳定性得以改善。 目的物的生物活性测定 体外生物活性测定方法有靶细胞培养计数法、3H-TaR 掺入法和酶法细胞计数等。体内生物活性测定要根据目的 产物的生物学特性建立适合的生物学模型。 第四节 目的产物的保存 液态保存 低温保存: 液态蛋白质样品在-10~20℃以下冷冻保存比较理想。 2. 在稳定PH条件下保存： 蛋白质较稳定的PH一般在等电点。保存液态蛋白质样品时，应小心调整到其稳定的PH范围内。 3. 在高浓度下保存： 一般蛋白质在浓溶液中比较稳定。 4. 在保护剂存在下保存： 多数蛋白质要求较为疏水的环境才能长期保存，加入某些稳定剂可以降低蛋白质溶液的极性以免变性失活。这类蛋白质的稳定剂有糖类、脂肪类、蛋白质类、多元醇、有机溶剂等。 固态保存 制成干粉或结晶： 固态蛋白质比液态稳定，一般蛋白质含水量超过 10%时容易失活：含水量降到5%时在室温或冰箱中 均比较稳定，但在37℃ 时活性则明显下降。长期保 存蛋白质最好的方法是把它们制成结晶或干粉；冰冻 干燥是保存酶普遍采用的方法之一。 2. 制成酶的衍生物： 这些衍生物，可使酶的耐热性提高，增加其 稳定性；如淀粉酶、细菌蛋白酶、核糖核酸酶、酰化酶等都可用某种高分子制成衍生物。 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 第五章 医药生物技术产品的后处理工程 后处理工程通常称之为下游工程(Downstream Processing); 它泛指从工程细胞或工程菌的大规模培养一直到目的产物的分离纯化、质量控制、产物保存等一系列操作技术，其中最重要的组成部分是产物的分离纯化。 本章主要介绍细胞破碎与固液分离，目的产物的分离纯化，质量控制及产品的保存。 第一节 细胞破碎与固液分离 细胞壁由坚固的多聚糖，乙酰葡萄糖胺和乙酰胞壁酸形成网状结构，这种结构，有一定的阻力，针对这种结构，细胞破碎方法分为机械和非机械两种方法。 机械破碎法 高速匀浆法(High Pressure homogenizer) 高速珠磨法(High-speed bead mill) 超声破碎法(Ultrosonication) 高压挤压法: 本方法是用特殊装置X-Press挤压机. 非机械破碎法 酶溶法(Enzymatic Lysis): 常用的溶酶有溶菌酶(Lysozyme), 葡聚糖酶 (Glucanase), 蛋白酶(Protease), 糖苷酶 (Glycosidase), 甘露糖酶(Mannanase),