生物分离工程细胞破碎资料.pptVIP

4、冻结-融化法 将细胞放在低温下冷冻（约-15℃），然后在室温中融化，反复多次而达到破壁作用。由于冷冻，一方面能使细胞膜的疏水键结构破裂，从而增加细胞的亲水性能，另一方面胞内水结晶，形成冰晶粒，引起细胞膨胀而破裂。对于细胞壁较脆弱的菌体，可采用此法。 但只适用于细胞壁较脆弱的菌体；破碎率较低，常需反复多次；冻融中，可能引起某些蛋白质变性。 5、干燥法 经干燥后的细胞，其细胞膜的渗透性发生变化，同时部分菌体会产生自溶，然后用丙酮、丁醇或缓冲液等溶剂处理时，胞内物质就会被抽提出来。 三、目标产物的选择性释放 破碎的目的是要得到一种或几种目标产物，因此，在细胞内存在的许多种物质中，选择性释放目标产物、而使其它物质尽量少地释放出来，并且尽量降低细胞的破碎程度，对下游的分离纯化操作的顺利实施是非常重要的。 利用珠磨法破碎酵母细胞时，酵母内各种酶的释放速率常数不同。一般靠近细胞壁和细胞膜的酶释放速度快，而细胞内部或细胞器内的酶随破碎的进行缓慢释放出来。因此，选择发现地释放目标产物是可能的。 关键是要知道目标产物的性质和在细胞同存在的位置，选择适当的破碎方法和操作条件。 选择性释放目标产物的一般原则 （1）仅破坏或破碎存在目标产物的位置周围 当目标产物存在于细胞膜附近时，可采用较混和的方法，如酶溶法（包括自溶法）、渗透压冲击法和冻结-融化法等。当目标产物存在于细胞质内时，则需采用强烈的机械破