《动物细胞工程》课件资料.ppt

过程小结： ①过程：膜融合 质融合 核融合 6.意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交称为可能 7.应用：①目前这一技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等重要手段 ②为制备单克隆抗体开辟了新途径。 ②重组细胞的特点：杂交细胞具有两个亲本的遗传性息，能表现两个亲本的特点 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 1.其由何种细胞产生？ 2.主要分布在哪里？ 3.如何得到抗体？ 知识回顾：1.什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 2.B淋巴细胞与抗体的关系： ①B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 ②动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 ③每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 3.传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？ 怎样解决这个问题？ 将抗原反复注射到动物体内，然后从动物 血清中分离 4.缺陷： 产量低，特异性差，纯度低 5.解决方法： 采用单个B淋巴细胞进行无性 繁殖，形成细胞群，产生化学性质单一， 特异性强的抗体。 ①思路：⑴要获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群 ⑵将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合 ②将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因： ⑴一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体 ⑵B淋巴细胞不能无限增殖，而小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖。 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 过程总结： 1.B细胞实际上是 2.单克隆抗体的制备过程经过几次筛选？其目的是什么？ 浆细胞 两次； 第一次筛选的目的是：获得杂交瘤细胞； 第二次筛选的目的是：获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 3.细胞融合后培养液中有几种细胞,如何筛选? BB B瘤 瘤瘤 ①细胞融合后培养液中有几种细胞 筛选杂种细胞 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获得杂种细胞。 第二次筛选： 在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 4.单克隆杂交瘤细胞的特点： ①具有两个亲本的遗传物质 ②产生特异性抗体 ③体外培养无限增殖 思考： 1、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 　　单克隆抗体的概念 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 单克隆抗体的特点： 特异性强，灵敏度高，可大量制备 3.单克隆抗体的应用： ①作为诊断试剂 （准确、高效、简易、快速的优点） 例：早早孕诊断盒 ②用于治疗疾病和运载药物 如：生物导弹（能将药物定向带到癌细胞所在位置，在原位杀死癌细胞。这样既不损伤正常细胞，又减少了药剂量） 一种诱导细胞融合的新方法 一种新细胞 灭活病毒 杂交瘤细胞 一个优势 单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 　 A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞 A 2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较 中，正确的是 A.诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同 D. 都能形成杂种细胞 D 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或