细胞培养技术要点详解.pptVIP

细胞培养技术 细胞培养概述 一、细胞培养基本原理与技术 (一)细胞在体外生长的条件 体外培养的细胞需要合适的环境和必需的条件才能生存和繁殖。 1.细胞的营养需要 血浆或血纤维蛋白原凝块中（早期），或在组织提取液等中生长。现知需要一些基本营养物质及生长因子等物质。 ⑴基本营养物质 包括：氨基酸(12种必需AA)、维生素、碳水化合物及一些无机离子。 ⑵促生长因子等物质 除基本营养物质外，培养细胞还需要促细胞生长因子等物质(如EGF,,IGF,IL等)才能正常生长、增殖。血清中含多种，但也有些组成不明，对细胞有害的成分。 (二)培养细胞常用设备和用品 (二)培养细胞常用设备和用品 1.常用设备和用品 ⑴超净工作台：组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。目前，超净工作台的广泛使用，很大程度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。 (二)培养细胞常用设备和用品 1.常用设备和用品 ⑵CO2培养箱:提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2(浓度为5％),易于使培养液的pH保持稳定，适用于开放或半开放培养。由于这种培养方法培养器皿内部与外界相通,培养箱内空气必须保持清洁,应定期以紫外线照射或酒精消毒。同时培养箱应放置盛有无菌蒸馏水的水槽,防止培养液蒸发,使箱内相对湿度始终保持为100％。 (二)培养细胞常用设备和用品 1.常用设备和用品 ⑶倒置显微镜 ⑷冰箱 ⑸离心机 ⑹电热干燥箱 ⑺水纯化装置 (二)培养细胞常用设备和用品 1.常用设备和用品 ⑻高压蒸汽消毒装置 ⑼过滤除 菌装置 ⑽细胞冷冻装置 其他 仪 器 细胞冷冻储存器：常用液氮容器。新型的细胞冷冻储存器可通过先进的电子控制器实现冻存自动化并监测液氮水平和样品温度；可配备先进的报警系统，分别警报液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况：同时具备热气体旁路系统，防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐，从而更有效地保护样品，防止升温。 (二)培养细胞常用设备和用品 2.培养器皿 ⑴培养瓶 ⑵培养皿 ⑶多孔培养板 ⑷离心管 ⑸移液管和吸管 ⑹其他玻璃器皿 冻存管 1.2ml 2ml， 5ml 离心管 5ml， 10ml ，15ml 50ml 细胞刮 (二)培养细胞常用设备和用品 3.解剖器械 4.微量移液器 (三)培养用品的清洗 清洗和消毒灭菌的主要目的是去除器皿上杂质及其对细胞生长有影响的物质及各种微生物。 1.玻璃器皿：供细胞生长的玻璃表面不但要清洁干净，而且要带适当电荷。一般玻璃器皿的清洗分为4步。 (1)浸泡：新的玻璃器皿表面呈碱性，并带有如铅等，使用前必须彻底清洗。先用自来水初步刷洗，5％ HCl中浸泡过夜，以中和其碱性。使用后的玻璃器皿应立即浸入清水中，避免器皿内蛋白质干涸后黏附于玻璃上难以清洗。 (2)刷洗：去除器皿内外表面的杂质。有两点需注意：一是防止损坏器皿表面光洁度，应选择软毛毛刷和优质洗涤剂,不宜用力过猛；二是不留死角,要特别注意瓶角等部位。刷洗后要将洗涤剂彻底冲洗干净,晾干。? (3)清洁液浸泡：清洁液由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水配成。具有很强的氧化作用和去污能力,对玻璃器皿无腐蚀。经清洁液浸泡后,残留的未刷洗掉的微量杂质可被完全清除。 (三)培养用品的清洗 清洁液可配制成三种不同的强度,其成分用量见下表 。 (三) 培养用品的清洗 2.橡胶用品：组织培养液中使用的胶塞、培养瓶盖子、针头等均不能以清洁液浸泡。清洗过程中，新的胶塞因带有滑石粉，应先用自来水冲洗干净，再进行常规清洗；使用后的胶塞、盖子应及时浸泡在清水中。然后用洗涤剂刷洗。 3.塑料器皿：包括各种培养板、培养皿及培养瓶等。这些产品主要为进口的一次性物品，