第十二章 植物组织培养室的构建及培养基、植物材料消毒液.ppt

培养室： 培养基的成分 1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。 （C、H、O、N、P、K、Mg、S和Ca） 氮：由硝酸盐和铵盐提供 铵盐过高会引发玻璃化苗 ＊当某些营养元素的供应不足时，愈伤组织所表现出来的症状如下： 氨基酸(AA)：是很好的有机氮源，可直接被细胞 吸收利用。最常用的是甘氨酸，其 他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、 天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。 有时应用水解乳蛋白或水解酪蛋白，它们含有约20种氨基酸的混合物，用量在10-000mg/L之间。由于它们营养丰富，极易引起污染。如在培养中无特别需要，以不用为宜。 天然复合物：其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。它对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。它的成分大多不清楚，所以一般应尽量避免使用。 ? 1)椰乳 是椰子的液体胚乳。 ? 2)香蕉 主要在兰花的组织培养中应用，对发育有促进作用。 ? 3)马铃薯(potato) 去 ? 4)水解酪蛋白 ? 5)其他 酵母提取液(YE)(0.01%-0.05%) 肌醇 (myo—inosltol)又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。通常可由磷酸葡萄糖转化而成，还可进一步生成果胶物质，用于构建细胞壁。肌醇与6分子磷酸残基相结合形成植酸，植酸与钙、镁等阳离子结合成植酸钙镁，植酸 可进一步形成磷脂，参与细胞膜的构建。 使用浓度一般为100 mg/L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。 作用：顶端分泌，诱导细胞分裂，促进生根。 用量：mg/L 吲哚乙酸：IAA（indo acetic acid） 萘乙酸 ：NAA（naphthalene acetic acid） 吲哚丁酸：IBA（indolebutyri acid） 2,4-二氯苯氧乙酸：2,4-D (2,4-dichlorophenoxybutyric acid) 用法：溶于95%酒精或者NaOH 生长素作用强弱顺序： 种类： 6-BA(6-苄基腺嘌呤) Kt (kinetin 激动素) Zt (zeatin 玉米素) TDZ（Thidiazuron ） 用法：溶于0.5 MHCl和NaOH GA3： 作用：促进幼胚发育，促进细胞伸长，打破休眠。 用法：易溶于水，一般用95%的酒精配成母液贮存。 琼脂是一种由海藻中提取的多糖类物质，本身并不提供任何营养，40 ℃凝固。固体培养时最好的固化剂。 用量：0.7%-1%。 活性炭(active carbon)： 活性炭为木炭粉碎经加工形成的粉沫结构，它结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作用，它的颗粒大小决定着吸附能力、粒度越小，吸附能力越大。温度低吸附力强，温度高吸附力减弱，甚至解吸附。 通常使用浓度为 0.5—30g/L。它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质，包括琼脂中所含的杂质，培养物分泌的酚、醌类物质以及蔗糖在高压消毒时产生的5—羟甲基糖醛及激素等。 活性炭(active carbon)： 作用：利用其吸附能力，减少一些有毒物质的影响，防止褐变；利于生根。 浓度：5—30g/L。 3.2 培养基的配制 1、 母液(stock solution)的配制和保存 所谓母液是欲配制液的浓缩液。 意义: ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取 ③便于低温保藏。 单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般用mg/ml。 混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后再混合成母液。 母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。 MS培养基配制表 MS母液配制： MSI 大量元素 20X MSII 微量元素 200X MSIII 铁 盐 200X MSIV 有机 物 200X MSV 肌 醇 200X 激 素 0.1mg/ml 植物激素母液的配制 ⑴生长素类： IAA、NAA、2，4-D、IBA 配制：先按要求称好100mg药品，置于小烧杯中，用0.1N NaOH溶解，再用