药学生物化学实验指导解析.docVIP

生物化学实验一、实验目的1．培养学生科学的思维方法作风，独立工作能力。2．学习基础生物化学实验方法，为今后的学习与研究准备更好的条件。3．培养学生爱护国家财物、爱护集体、团结互助的优良道德品质。4．培养学生的书面及口头表达能力。二、实验的总要求1．按教研室予先公布的实验进度表，了解各次实验的具体内容，并认真做好预习。弄清各步骤的意义，避免教条或机械式做实验。未预习者不得进实验室。2．进行实验不仅要求结果良好，而且要求敏捷高效。一切步骤都按正规操作法进行；样品与试剂勿过量取用；注意力集中，避免差错。3．实验中观察要仔细，记录要详尽、及时与客观无论实验成功与失败，都应直接记在实验报告本中，不得于实验后追记对于失败的实验，要分析其原因。4．实验室是集体学习与工作的场所，实验时应保持肃静，不得大声喧哗，以免影响他人的工作与思考。实验后应清洗过的仪器及清理自己的实验场所。对师长尊敬，对同学要团结友爱。三、实验报告实验报告的书写是培养学生书面表达能力和科学作风的重要手段之一，实验者应该重视。实验报告的内容包括下列各项：实验名称、实验日期、实验的、实验原理、实验步骤，实验记录、计算、讨论或小结。实验记录应包括随做随记的原始记录。书写实验报告要字迹工整，语句通顺。书写工整的实验报告，是尊师的重要表现之一。 、玻璃仪器的洗涤一般玻璃仪器用肥皂或去污粉以毛刷洗涤即足以满足要求，洗后应将肥皂或去污粉仔细冲掉，将水倾去后，器壁不挂水珠，视为合格。铬酸洗液仅用于毛刷不能洗净的仪器，切勿滥用普通玻璃仪器之洗涤。使用铬酸洗液时，仪器应干燥；过多的水份将使洗液迅速失效。用过之铬酸洗液须加以保存以反复使用，直至为绿色后方可舍弃；其舍弃法与浓硫酸液相同。用洗液浸洗过的玻璃仪器，应先用自来水冲洗，然后再用蒸馏水或去离子水清洗，清洗时，宜采用“少量多次”原则以节约蒸馏水，同时清洗的效率也高。、舍弃物的处理舍弃物必须依照其性质作适当处理。以免造成实验材料浪费，损坏水槽及下水管道，或污染实验环境。1．所有固体舍弃物（例如用过的滤纸、损坏的软木塞及橡皮物、玻璃渣、火柴梗等）。必须放入废物筒或篓中，切勿丢水槽中。2．废硫酸或洗液，应先倾入大量水中，再倒入水槽中，并以大量水冲走。3．实验完成后的沉淀或混合物，若含有可提取或收回的贵重物品者，不可随意舍弃，应放入教师指定的回收器中。 基础性实验 实验一总糖的测定---蒽酮比色法目的　 掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法 实验原理　 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。 本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。　 实验器材及试剂 1、马铃薯干粉 2、可调试移液器或移液管 3、可见分光光度计（723型） 4、电子分析天平 5、水浴锅 6、电炉 7、蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。 8、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。 操作： 1.制作标准曲线　 取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线。 表1 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作 单位：ml?? 管号 0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 ? 置冰水浴中5min 蒽酮试剂 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 ? 沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却，室温放10min,于620nm处比色 葡萄糖浓度（mg/ml） ? ? ? ? ? ? ? A620nm ? ? ? ? ? ? ? 2.样品含量的测定　　　 样品液的制作： 精确称取马铃薯干粉0.1g置于锥形瓶中—→加入30ml沸水—→沸水浴30min（不时摇动）—→取出，3000rpm离心10min（或过滤）—→反复洗涤残渣2次—→合并滤液—→冷却至室温—→定容到50ml的锥形瓶中—→再从中取出1ml，再定容到10ml的容量瓶中 样品液的测定： （1）取4支试管，按照表2加样（加蒽酮时需要冰水浴5min冷却） 表2 蒽酮比色法定糖——样品的测定 单位：ml????? 试管号 1 2 3 4 样液 0 1.0 1.0 1.0 蒸馏水 1.0 0 0 0 蒽酮 4.0 4.0 4.0 4.0 A620nm ? ? ? ? （2）加样冷却完成后置沸