仪器分析实习指导_38733解析.doc

第五章 现代食品安全检测技术 第一节 高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的四环素 一、实验目的 掌握高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的四环素的原理 熟悉高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的四环素的实验方法 了解高效液相色谱仪的基本结构与使用方法 二、实验原理 （一）四环素是一种广谱抗菌素，可用于治疗和预防一些动物性疾病，但如果长期使用，将导致四环素类药物在动物类组织中的残留。残留在动物类组织中的四环素类药物会影响食用者的健康。四环素类药物的毒性反应主要表现为对胃、肠、肝脏的损害及牙齿的染色等，还会造成过敏反应、二重感染、致畸胎作用。因此应严格控制其在食品中的残留量。 （二）用酸性的Na2 EDTA-Mcllvaine缓冲溶液将蜂蜜中蛋白质沉淀 ,同时将四环素提取出来，以草酸与乙腈为流动相，C18柱作为色谱柱，反相分离，紫外检测器检测，在四环素的标准曲线的线性范围内，依据其测得的峰面积与其含量间的线性关系进行定量分析。 三、仪器和试剂 （一）仪器 1. 高效液相色谱仪 2．紫外检测器 3．涡旋混合器 4．离心机 5．天平 （二）试剂 1．甲醇 2．乙腈 3．乙酸乙酯 4．磷酸二氢钠 5．盐酸 6．柠檬酸 7．乙二胺四乙酸二钠 8．草酸 四、操作步骤 1．提取 （1）称取5g试样，置于50mL离心管中，加入30mL0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine溶液,快速混合1min, 以3500r/min离心10min，上清液倒入另一离心管中。 （2）将上清液通过固相萃取柱，用2mLNa2EDTA-Mcllvaine溶液冲洗，再用20mL水洗，弃去全部流出液，减压抽干10min，用4mL流动相洗脱，定容至4mL，供液相色谱-紫外检测器测定。 2．标准溶液的配制 （1）称取四环素10mg，用甲醇溶解，并转移至100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得四环素储备液（0.1mg/mL）。准确移取该溶液1mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度,得0.01 mg/mL。准确移取该溶液0，0.05，0.10，0.20，0.40，0.80mL于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。得四环素标准溶液的浓度分别为0.05，0.10，0.20，0.40，0.80(g/mL。 3．测定 （1）色谱条件：色谱柱：C18色谱柱，150mm×4.6mm, 5(m；流动相：0.01mol/L草酸溶液（pH=2.5）-乙腈（80：20）；流速：1mL/min; 柱温：室温；紫外检测器：检测波长：355nm。 （2）将上述已制备好的不同浓度的四环素标准系列溶液一次进样20(L，依据四环素的峰面积定量。以标准系列溶液的浓度为横坐标，其相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。 （3）样品的测定：取已处理好的样品溶液20(L进样分析，根据峰面积带入回归方程中计算。 五、结果计算 按下式可计算出蜂蜜中四环素的含量 X=C×V/m 式中：X为试样中四环素的含量，单位为(g/g; C为从标准曲线计算得到的被测组分溶液浓度，单位为(g/mL；V为试样溶液定容体积，单位为mL；m为试样溶液所代表的试样质量，单位为g。 六、注意事项 （一）流动相使用前必须经过脱气。如果流动相中含有气体，在较高的柱压下会产生气泡，使流动相流动受阻，对分离样品产生不利影响。 （二）固相萃取柱使用前应用5mL甲醇和10mL水活化。 （陈凌云）第二节 液相色谱-串联质谱法测定水产品中的氟苯尼考 一、实验目的 （一）基本熟悉现代食品安全检测技术中高效液相色谱-串联质谱联用技术的测定方法和特点； （二）了解液质联用技术的基本原理以及在食品安全检测中的重要性。 二、实验原理 氟苯尼考又名氟洛芬、氟甲砜霉素，分子式为C12H14Cl2FNO4S；分子量为358.2127；结构式为。氟苯尼考是一种兽用抗菌药，用于敏感细菌所致的猪、鸡及鱼的细菌性疾病，尤其对呼吸系统感染和肠道感染疗效显著。 样品中的氟苯尼考在碱性条件下，用乙酸乙酯提取，提取液经旋转蒸发挥干，残渣以水溶解，经正己烷液-液萃取脱脂。液相色谱-串联质谱仪，以氘代氯霉素（d5-氯霉素）为内标，MRM离子对方式检测，内标法定量。 三、试剂和仪器 甲醇（HPLC）、乙酸乙酯（AR）、正己烷（AR）、氨水（AR，25%～28%）、无水硫酸钠（AR）、氟苯尼考和氘代氯霉素（d5-氯霉素）标准物质（纯度99%）、超纯水。 液相色谱-串联质谱仪（API 4000 Qtrap），配电喷雾电离离子源（ESI）；分析天平，感量0.01mg和0.001g；离心机，≥4000r/min；小型台式离心机，≥13000r/min；组织捣碎机；匀浆机；减压旋转蒸发仪；涡旋振荡器；聚丙烯离心管：带盖，50mL，1.