植物组织内丙二醛(MDA)含量的测定实验设计解析.doc

实验设计（一） 题目：植物组织内丙二醛（MDA）含量的测定——比色法 组数：第七组 组长：杨曼 学校：南通大学 年级：13级 专业：生物工程131 实验目的 1，根据待测植物的抗逆生理，掌握对待测植物做逆境处理的方法 2，比较同种胁迫逆境处理对待测植物不同部位生长的影响 3，比较不同胁迫逆境处理对待测植物生长的影响 4，了解植物组织内MDA积累水平对植物生理状态的影响 5，掌握比色法测定植物组织内MDA含量的方法和步骤 实验原理 1，植物抗逆是植物对抗不良环境，比如抗旱、抗盐碱、抗涝、抗风、抗冻、抗病虫害等的能力. 在自然界条件下，由于不同的地理位置和气候条件以及人类活动等多方面原因，造成了各种不良环境，超出了植物正常生长、发育所能忍受的范围，致使植物受到伤害甚至死亡。这些对植物产生伤害的环境称为逆境（stress）或胁迫。而植物对不良环境的适应性和抵抗力为抗逆性（stress resistance）或抗性. 逆境的种类多种多样，包括物理的、化学的、生物因素等，可分为生物逆境和非生物逆境两大类。对植物产生重要影响的非生物逆境主要有水分（干旱和淹涝）、温度（高、低温）、盐碱、环境污染等理化逆境，生物逆境主要包括病害、虫害、杂草等。理化逆境之间通常是相互联系的；例如水分亏缺通常伴随着盐碱和高温逆境，水分胁迫、低温胁迫、病虫害和大气污染等都可引起活性氧伤害。 结果表明,随着盐度增加,米草株高呈下降趋势,在高盐度(5)下,米草叶面积、叶长等指标与对照组相比明显下降,鲜重与低盐度组比较显著下降。 提摩西草喜冷凉湿润气候。越冬性好。春季气温高于5℃时开始返青，秋季气温低于5℃停止生长。较耐淹浸，不耐干旱。在35℃以上的持续高温干燥条件下，不能安渡夏季。要求中性及弱酸性土壤。耐碱性较弱，在石灰质含量多的土壤上生长不良。 3，植物器官衰老或在逆境下遭受伤害·O2，·OH等)积累，诱导细胞膜中的不饱和脂肪酸发生过氧化作用，膜脂过氧化丙二醛（MDA）是膜脂过氧化的最终分解产物，从膜上产生的位置释放出后，与蛋白质、核酸起反应修饰其特征；使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成。MDA的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害。 丙二醛（MDA）是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮），其最大吸收波长在532nm 5，但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加植物在遭受低温、干旱、盐碱等逆境时，机体会响应这样的环境变化，而后调节有些酶的合成、活性等，结果是提高可溶性糖和氨基酸的浓度，提高细胞内渗透压，进而提高细胞的渗透吸水能力，适应逆境，因此测定植物组织MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的消光度值，所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100～300μg/g DW，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3＋的终浓度为0.5μmol/L。 双组分分光光度计法 据朗伯-比尔定律：D＝，当液层厚度为1cm时，k=D/C，k称为该物质的比吸收系数。当某一溶液中有数种吸光物质时，某一波长下的消光度值等于此混合液在该波长下各显色物质的消光度之和。?已知蔗糖与TBA显色反应产物在450nm和532nm波长下的比吸收系数分别为85.40，7.40。MDA在450nm波长下无吸收，故该波长的比吸收系数为0，532nm波长下的比吸收系数为155，根据双组分分光度计法建立方程组，求解方程得计算公式：C1(mmol/L)=11.71450 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? C2(μmol/L)=6.45(A532－600)－0.56450 ? ? ? ? 式C1－为可溶性糖的浓度； C2－为MDA的浓度； 450、532、600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的消光度值。 实验试剂： 碳酸钠，碳酸氢钠，植物营养液，10%三氯乙酸（TCA）；0.6%硫代巴比妥酸先加少量的氢氧化钠（1mol/L）溶解，再用10％的三氯乙酸定容石英砂。 紫外可见分光光度计1台；离心机1台；电子天平1台；10ml离心管支；研钵套；试管支；刻度吸管：10ml 1支，2ml 1支；剪刀1把。 ??μmol/g） 植物根部MDA含量（μmol/g） 碱胁迫处理起始 0