内毒素及β-葡聚糖检测资料讲解.ppt

侵袭性真菌感染的特点 不产生内毒素和外毒素，致病机理不明； 致病力一般较弱，机体免疫低下时发生； 感染菌种变化：白色念珠菌感染下降，曲霉菌感染增长趋势上升明显； 早期症状无特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死亡率高。 主要可引发侵袭性真菌感染的疾病 呼吸系统疾病：肺炎、肺纤维症 感染及寄生虫病：肺结核、腹腔内脓肿、AIDS 循环系统疾病：脑出血、脑梗塞、硬膜下血瘤术后、胸部大动脉瘤术后 内分泌疾病：糖尿病 血液及造血器官疾病：再生障碍性贫血、DIC 肿瘤类：胃癌，肝癌，肝内胆管癌，肺癌，多发性骨髓瘤，白血病，恶性淋巴瘤 “G”试验 1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。 G试验检测评价 BG值在侵袭性真菌感染临床表现出现之前就已经高于正常值 相关报道5例确诊IFI及3例临床诊断的IFI患者，发现BG值升高出现在发热、咳嗽、胸痛等症状和肺部CT检查发现以前 。 平均早于发热5d 早于呼吸道症状10d G试验临床应用 1　明确诊断 　　（抗真菌药物治疗前） 　2　治疗效果监测 　　（抗真菌药物治疗后） 　3　连续2次采血进行G试验 侵袭性真菌感染的临床检测方法 直接培养真菌法--敏感性低，耗时长, 培养阳性率低。培养结果是定性的，有些标本采集困难 G试验：通过检测(1-3)-β-D-葡聚糖的含量，判断是否有真菌感染。耗时短，灵敏度高，特异性强，定量检测可判断感染严重程度 PCR技术：真菌的抗原、抗体及代谢产物的血清学检查和真菌核酸检测 真菌1-3-β-D葡聚糖检测原理 真菌1-3-β-D葡聚糖检测试剂盒（光度法） 检测原理：真菌1-3-β-D葡聚糖能特异性激活反应主剂中的G因子、凝血酶原等，发生酶的级联反应从而引起吸光度变化，根据检测其溶液吸光度变化对真菌1-3-β-D葡聚糖浓度进行定量。 试剂中添加的两性电解质甘氨酸、氨基糖苷类抗生素及表面活性剂可抑制脂多糖对B、C因子的激活，对革兰阴性菌脂多糖有特异性屏蔽作用。 MB-80微生物快速动态检测系统 真菌1-3-β-D葡聚糖参考值 检测值﹤60pg/ml,阴性。 检测值介于60～100pg/ml之间，临床观察期，建议动态采血检测。 检测值﹥100pg/ml，阳性(深部真菌感染)，建议临床结合症状进行治疗。 检测方法的局限性 只能检测真菌1-3-β-D葡聚糖的含量，不能区分真菌种属，不能检测结合菌和隐球菌。 内毒素与β-葡聚糖的检测比较 已知能与鲎试剂发生反应的物质有细菌内毒素和真菌1-3-β-D葡聚糖，但它们的反应曲线不一样。内毒素反应曲线为S型特征曲线，而β-葡聚糖反应曲线为经过0点的斜线。 念珠菌显色培养基的菌落颜色 对于念珠菌血症, G试验检测是首选检查 热带念珠菌----灰蓝色 白色念珠菌 ----绿色 克柔念珠菌----粉红色 光滑念珠菌----紫红色 标本采集及保存 检测样本：血液、肺细胞灌洗液 采集要求： 1.采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管； 2.常规病人早上用药治疗前空腹采血，血透析患者透析前采血 标本采集及保存 及时送检，及时检测：2-3h内检测 不合格标本：严重黄疸、溶血、乳糜标本会影响测结果，需重新采血进行检测。 干扰因素 据报道可能产生假阳性的原因有： 1.应用纤维素膜进行血液透析患者; 2.某些纱布或其他医疗物品中含有葡聚糖; 3.静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白）等含有葡聚糖; 干扰因素 4.某些细菌败血症患者（尤其是链球菌败血症）; 5.抗肿瘤类药物(香菇多糖、裂殖菌多糖); 6.磺胺类药物; 7.蘑菇类食物; 临床细菌内毒素及(1-3)-?-D-葡聚糖检测的国内外发展 国外：血液（包括血浆、脑脊液、血清、腹水液、尿液、唾液、乳汁等）中内毒素以及(1-3)-?-D-葡聚糖微量定量检测已经成为现实，目前在美国、日本等国均已出现专用细菌内毒素及(1-3)-?-D-Glucan检测仪器及配套的检测试剂盒，而且获得FDA及厚生省批准文号，作为一种日常检测项目。 临床细菌内毒素及(1-3)-?-D-葡聚糖检测的国内外发展 国内：MB-80 检测系统，为国内独家研制和生产的检测临床内毒素及(1-3)-?-D-Glucan的专用仪器，同时具有配套的检测试剂盒 EKT-5Mset and GKT-%M set　获得SDA批准文号。 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力；