动物与家蚕的转基因技术资料讲解.pptVIP

检测的方法 A. 外源基因的整合检测 它是检测动物基因组中是否携带外源DNA。常用的方法是用目标基因的一段序列作引物，PCR仪扩增目标DNA，再通过电泳初步检测是否含有目标基因。然后，用Southern 杂交检测PCR阳性个体是否含有目标基因，如果出现阳性，就可断定为转基因阳性动物。 B. 外源基因的转录检测 它是用Northern 杂交法对转基因动物某一组织的mRNA进行分析检测，出现阳性表明外源基因具有转录活性。 C. 外源基因的表达检测 它是检测转基因动物组织中是否含有目标基因编码的外源蛋白质，常用的方法有酶联免疫法、免疫荧光法和Western 杂交法。 转基因动物的应用 在医学上 A.制备动物疾病模型 与疾病相关的基因被克隆后,通过转基因技术制备动物疾病模型,可用来研究疾病的发生、发展规律和治疗药物的筛选,以此确定确定此疾病的最佳治疗方案。目前，在世界范围内发现人类的遗传疾病有3500多种,已建立约15种转基因疾病模型，其中包括糖尿病、高血脂症、β－地中海或镰刀型贫血症，阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s Disease),动脉粥样硬化症等常见的疾病。 B. 用以研究癌基因的活动规律和肿瘤的发生机理。 如SV40的启动子与胰岛素或晶状体蛋白基因重组后,制备的转基因动物出 现胰腺瘤或晶状体瘤,进一步研究发现SV40启动子的72个核苷酸与肿瘤的发生有密切关系,已建立乳腺癌和前列腺癌的小鼠。 C. 用以治疗遗传疾病 随着人类基因组计划的完成和基因定点整合技术的成熟，转基因技术有可能治愈人类的遗传疾病。 D. 生产人的代用器官 用表达病人补体调节蛋白基因或敲除细管内皮细胞表面抗原决定簇基因猪的器官可替代人的患病器官,延长病人的寿命。 家蚕篇 转基因家蚕所用载体 转基因载体是一类装载有外源DNA并使其随自身复制而得到扩增的DNA构造, 并且具有可以将所携带的外源基因在一定条件下插入到宿主基因组中的功能, 转基因载体包括一些固有的元件, 如启动子、转座序列等, 进行家蚕转基因操作, 除了应注意目的基因的导入方法和导入时期外, 选择合适的启动子和构建合适类型的载体也是技术的关键。 转基因家蚕载体中所用启动子 选择合适的启动子也是成功表达外源基因的关 键因素之一, 启动子是位于一个基因上游的一段 DNA序列, 它含有蛋白质(转录因子和RNA聚合 酶)的结合位点, 目前家蚕转基因多采用家蚕体内 广泛存在的肌动蛋白A3启动子和多角体病毒极早 期蛋白E1启动子。 基于转座子的载体 目前应用于转基因家蚕研究最多的是piggyBac转座子, 它也是昆虫生殖 系转化使用最广泛的转座子, piggyBac转座系统常作为家蚕转基因研究采用的有效载体, piggyBac转座子的结构 基于病毒的载体: 用于家蚕基因工程的杆状病毒主要有家蚕核型多角体病毒( BmNPV)和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒( AcMNPV), 既可用于家蚕的种系转移, 又可用于瞬时表达, 该方法是将外源基因插入到杆状病毒特定位点, 得到重组病毒, 通过重组病毒与家蚕基因组之间的同源重组将外源基因整合到家蚕基因组。 基因打靶载体 基因打靶技术以同源重组为基础, 通过同源重组将外源基因定向地融合进靶细胞基因组中的某个位点, 自20世纪80年代后兴起, 人为地对某一预先确定的靶位点进行定点突变, 可以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的。 与piggyBac转座子相比, 其突出的优点是克服了随机整合的盲目性和危险性, 因此是一种理想的修饰和改造生物遗传物质的方法。 关于家蚕-基因导入的方法 A.反转录病毒感染法(retrovirus infection) B.显微注射法(microinjection) C.胚胎干细胞法(ES cell transfer method) D.精子载体法(Sperm-mediated gene transfer) E.生殖细胞转染法(Germ cell transfected ) F.细胞核移植法(Cell nuclear transfer) 转基因家蚕的应用研究 研究基因功能: 在家蚕的全基因组框架图完成之后, 目前的主要工作是对家蚕基因组计划所获得的大量基因进行研究, 以探索其具体的生物学功能, 由于转基因技术可以实现家蚕功能基因的过量表达或者基因功能的缺失, 因此将成为研究家蚕基因功能的重要方法之一。要最终鉴定基因功能,最理想的方法是将分离的基因导入家蚕体内, 在个体水平上验证其是否具有功能, 特别是对于功能基因组