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(2)“平板划线”实验操作 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 灭菌接种环 (1)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么? 杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者 接种结束后 杀死上次划线时残留菌种,使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端,从而使每次划线时菌种数目逐渐减少,直至得到单个细胞 每次划线前 杀死接种环上原有微生物 取菌种前 目的 灼烧时期 (2)在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线? 答:以免接种环温度太高,杀死菌种。 (3)在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线? 答:线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 3个划线平板 1个不划线平板 (重复实验) (空白对照) (3)培养 放入37℃恒温箱中培养12h~24h 2.稀释涂布平板法 ①菌液的梯度稀释: ②涂布平板操作: (1)概念与原理: 聚集的微生物 单个细胞 菌液梯度稀释 菌落 涂布平板 (2)操作: 生长繁殖 专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养 讲课老师:张大华 学习目标 1、了解有关培养基的用途和种类;知道培 养不同的微生物需要不同的培养基。 2、了解培养基的基本成分,理解尽管培养 基的配方各不相同,但基本成分相似 3、掌握无菌技术操作的要求,能运用该技 术完成培养基的制备、倒平板、平板划 线等操作。 4、能区别消毒和灭菌,会运用常用的消毒 和灭菌方法。 一 基础知识 1.概念: 人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。 (一)培养基 固体培养基 液体培养基 有 无 凝固剂琼脂 分离 鉴定 工业 生产 (1)按物理性质划分: 单个 或少数菌体 2.特征: 大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。 3.意义: 1.定义: 鉴定菌种的重要依据 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 ※菌落 天然培养基 合成培养基 化学成分不恒定的天然有机物 如:牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基 化学成分完全了解的物质配制而成的培养基 如:高氏1号培养基、查氏培养基。用于分类和鉴定 (2)按化学成分划分: 基础培养基 鉴别培养基 含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质 将某种类微生物从混杂的微生物群体中分离出来 用于鉴别不同类型微生物的培养基 选择培养基 (3)按用途划分: ※几种选择培养基 ①加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌 ②不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌 ③不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物 3.基本成分: 碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源 无机碳源: 有机碳源: CO2、CO32-、HCO3- 牛肉膏、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源 无机氮源: 有机氮源: NH4+、NO3- 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等 注:含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 4. 配制原则 (1)目的明确: (2)营养全面、浓度适宜、比例恰当 (3)适宜的pH值: 有机碳源 异养型: 根据微生物的种类、培养目的选择原料 自养型: 不加碳源 加入缓冲剂 细菌偏碱,真菌偏酸 (CO2碳源) 生产 科研 微生物生长不可缺少的微量有机物 如:维生素、氨基酸、碱基等 (4)特殊营养: ※蛋白胨:动物蛋白初步消化的产物,富含有机氮化合物,也含有一些维生素和糖类。主要提供氮源和维生素。 ※牛肉膏:新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而成,含有多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质。提供碳源、氮源、能源、磷酸盐和维生素。 课堂检测 1、有关微生物营养物质的叙述中,正确的是( ) A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 D 2、下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是( ) A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前 B 编号 成分 含量 ① 粉状硫 10g ② (NH4)2SO4 0.4g ③ K2HPO4 4.0g ④ MgSO4 9.25g ⑤ FeSO4 0.5g ⑥ CaCl2 0.5g ⑦ H2O 100m
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