HLAHPA血型系统资料讲解.ppt

淋巴细胞的提取 淋巴细胞分离液提取淋巴细胞 免疫磁珠分离T淋巴细胞 淋巴细胞分离液提取淋巴细胞 原理:淋巴细胞与血液中的其他成分存在比重差异，利用密度在1.076±0.001g/ml之间而且近于等渗的淋巴细胞分离液,作密度梯度离心时,血液中的红细胞和淋巴细胞按相应密度梯度分布。根据此原理将全血标本或白膜层细胞悬浮液缓慢地加于分离液上层，经离心沉淀，红细胞、颗粒细胞、多核细胞沉于管底；淋巴细胞和单个核细胞则悬浮于血浆与分离液的界面层之间。 淋巴细胞分离液提取淋巴细胞 仪器和试剂 ： 台式水平式离心机， 淋巴细胞分离液， PBS缓冲液， 生理盐水(0.9%NaCl)， 刻度离心管， 吸管， 玻片、 记数盘、 显微镜等。 淋巴细胞分离液提取淋巴细胞 样品 ： 全血或白膜： 右旋柠檬酸盐(Acid Citrate Dextrose, ACD) 或EDTA抗凝。 可接收标本： 病人----当天抽取的静脉血标本，不抗凝全血； 献血员（供者）----ACD、EDTA抗凝全血； 标本上有与验单相对应的患者姓名或编号，外包装合格无污染 不可接收标本： 用肝素抗凝的全血； 标本上无与验单相对应的患者姓名或编号； 标本有发生污染、溶血、脂血等情况 淋巴细胞分离液提取淋巴细胞 操作流程 ： 离心1800rpm/20′ 吸出白膜 离心800rpm/5′,弃上清 用Terasaki液调整细胞浓度至2×106/L备用 淋巴细胞分离液提取淋巴细胞 注意事项 细胞悬液红细胞污染，加蒸馏水40〞 立即用PBS洗涤（可重复）； 淋巴细胞分离液使用前应预温至室温，否则会影响分离液比重，易使血小板和淋巴细胞发生聚集； 实验过程中室温应保持在22～28℃之间，温度太高易使细胞失活，温度过低易使血小板、白细胞聚集。 免疫磁珠分离T淋巴细胞 原理: 利用结合抗CD2单克隆抗体的免疫磁性小珠（直径＜1um金属颗粒）制备成T磁珠，T磁珠可特异性与T细胞表面的E玫瑰花环受体结合；利用具有强磁力的专用磁力架进行吸附和洗涤，分离出高纯度T淋巴细胞。 免疫磁珠分离T淋巴细胞 仪器和试剂 ： T荧光磁珠试剂， 洗涤液：PBS、 PBS/枸橼酸， 磁性分离架， 试管， 吸管。 免疫磁珠分离T淋巴细胞 样品 ： ACD抗凝全血或白膜 免疫磁珠分离T淋巴细胞 操作步骤 ： 取ACD抗凝血 加入免疫荧光磁珠 旋转，使细胞与磁珠充分混匀 置磁架孔中将磁珠与液体分开 去除液体 用PBS清洗2～3次 用Terasaki液调整细胞浓度至2×106/L，备用 免疫磁珠分离T淋巴细胞 注意事项： 绝对不可使用肝素类抗凝剂； ＜24h分离可得到最多的细胞量， ＞24h应20～25℃/水平放置； 经淋巴细胞分离液分离出的淋巴细胞，再用免疫磁珠分离，可得到纯度更高T、B淋巴细胞。 血小板交叉配血标本接受、及报告发放操作流程 接受患者标本 核对验单和试管姓名、编号是否一致 核对试管是否符合实验要求 验单开具是否完整 符合要求，打电话去发放科询问是否有预约配型血小板 确定有预约配型血小板 开收费单 去机采科取标本 通知机采科留取标本 去发放科留取标本 与发放科同事口头交接，自行贴留样标签 无预约配型血小板 家属打电话联系医生，要求预约 无，拒收 记录询问的时间、询问人、询问结果 与机采科同事口头交接贴留样标签 实 验 发报告 把报告单交发放科 互助血小板交叉配血标本接受、及报告发放操作流程 接受患者标本 核对验单和试管姓名、编号是否一致 核对试管是否符合实验要求 验单开具是否完整 符合要求，打电话去发放科询问是否有预约互助配型血小板 确定有预约互助配型血小板 抽血 核对捐血者身份证 病人家属自带血样 签定委托书 无预约配型血小板 家属打电话联系医生，要求预约 无，拒收 记录询问的时间、询问人、询问结果 开收费单 无，拒收 实 验 发报告 把报告单交病人家属 实验流程 核对标本与验单 检测病人ABO，Rh（D）血型 填写实验记录 开始做实验 结果记录 打印报告单 核对并签发 姓名： 性别： 年龄： 标本号： 临床诊断： ABO血型： 送检目的：血小板交叉配型 标本状态：符合要求 送检医院： 标本来源：本中心抽取 / 自送 送检医生： 科室： 送检日期： 住院号/ID： 病床号： 联系电话： 检测结果 患者血型： 正定型 反定型 RH（D） 供者NO. ABO血型 血袋编号 （身份证号码） 实验方法 结果 1 2 交费情况： 备注： 实验者：