第节色谱法概述解析.ppt

* 第十五章 色谱分析法 （共16学时） 第一节 色谱分析法理论基础 一、 概述 * 一、色谱法的特点、分类和作用 1.概述 混合物最有效的分离、分析方法。 俄国植物学家茨维特(Tsweett)在1906年使用的装置：色谱原型装置，如图。 色谱法是一种分离技术， 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。 （动画） * 色谱法 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。 （动画） 与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础 * 2.色谱法分类 (1)气相色谱：流动相为气体（称为载气）。 按分离柱不同可分为：填充柱色谱和毛细管柱色谱； 按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱 * 液相色谱 (2)液相色谱：流动相为液体（也称为淋洗液）。 按固定相的不同分为：液固色谱和液液色谱。 离子色谱：液相色谱的一种，以特制的离子交换树脂为固定相，不同pH值的水溶液为流动相。 * (3)其他色谱方法 薄层色谱和纸色谱： 比较简单的色谱方法 凝胶色谱法： 测聚合物分子量分布。 超临界色谱: CO2流动相。 高效毛细管电泳: 九十年代快速发展、特别适合生物试样分析分离的高效分析仪器。 * 3.色谱分析法的特点 （1）高选择性 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。 （2）高灵敏度 可以检测出g(10-6)级甚至g(10-9)级的物质量。 （3） 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。 （4） 高效能 气相色谱：沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。 不足之处： 被分离组分的定性较为困难。 * 二、色谱图及色谱基本参数 1.基线 无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。 2.保留值 （1）时间表示的保留值 保留时间（tR）：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间； （动画） 死时间（tM）：不与固定相作用的气体（如空气）的保留时间； 调整保留时间（tR ＇）：tR＇= tR－tM * （2）用体积表示的保留值 保留体积（VR）： VR = tR×F0 F0为柱出口处的载气流量， 单位：mL/min。 死体积（VM）： VM = tM×F0 调整保留体积(VR＇)： V R= VR－VM （动画） * 3. 相对保留值r21 组分2与组分1调整保留值之比： r21= t′R2 /t′R1= V′R2 /V′R1 相对保留值只与柱温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关，它表示了固定相对这两种组分的选择性。 * 4.分配比 k 在实际工作中，也常用分配比来表征色谱分配平衡过程。分配比是指在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的质量比： 分配比是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化。 分配比是衡量色谱柱对组分保留能力的参数，数值越大，该组分的保留时间越长。 分配比可以由实验测得。 分配比也称： 容量因子(capacity factor)；容量比(capacity factor)； * 5. k与分配系数K的关系 式中： 分别表示组分x在固定相和流动相中的浓度; Vm为流动相体积，即柱内固定相颗粒间的空隙体积； Vs为固定相体积，对不同类型色谱柱，VS的含义不同； 气-液色谱柱： VS为固定液体积； 气-固色谱柱： VS为吸附剂表面容量； * 分配比k的讨论 一定温度下，组分的分配比k越大，出峰越慢； 试样一定时，k主要取决于固定相性质； 每个组份在各种固定相上的分配比k不同； 选择适宜的固定相可改善分离效果； 试样中的各组分具有不同的k值是分离的基础； 某组分的k =0时，即不被固定相保留，最先流出。 * 6. 区域宽度 用来衡量色谱峰宽度的参数，有三种表示方法： （1）标准偏差(?)：即0.607倍峰