鸡α和β干扰素基因的克隆及原核表达.pdfVIP

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2016-05-12 发布于安徽
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鸡α和β干扰素基因的克隆及原核表达.pdf

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摘要本试验参照Genebank上已发表的鸡a、B干扰素基因序列(序列号分别为：干扰素全基因、去掉信号肽的成熟蛋白基因以及鸡p干扰素去掉信号肽的成熟蛋白基因。将扩增得到的特异性片断分别克隆A．pMDl9．T载体中，转化感受态细胞DH5口中，提取质粒鉴定并进行序列测定。测序结果表明，鸡a干扰素全基因长为582bp，去掉信素全基因与不同亚型参考基因序列同源性在97．9％以上，与IFNAl亚型同源性高达 99．3％。鸡B干扰素去掉信号肽的成熟蛋白基因长为53lbp，与参考序列同源性为100％。将克隆的鸡a、B干扰素去掉信号肽的成熟蛋白基因分别正向亚克隆到表达载体于扰素的成熟肽蛋白基因均正确的插入了原核表达载体pGEX．2T中。将含有重组表达经SDS．PAGE电泳后，均在约44KD处出现明显的蛋白质表达条带，表明重组表达载 ‘ 白。关键词：鸡a、p干扰素；基因克隆；原核表达 and ofChicken ProkaryoticExpression Cloning InterferonGene 0【and p Abstract Three were tothe ofchickeninterferonaand primersdesignedaccordingsequences in thewholeofthechickeninterferono【、themature Genebank,and D gene proteingene withoutthe andthemature withoutthe of signalpeptide proteingene signalpepfide chickenwere PCRfromtheDNAofchickenliver．The B amplifiedthrough resulting wereclonedintothevector19·Twhichwerefurthertransferred specificsequences pMD intothe cell the were and extracted，identified competentDH5％andplasmids sequenced． that interferonQ consistedof mature 111eresultshowsthewholechicken gene 582bp，the withoutthe the inthe proteingene signaIpeptide486bp．Compared研msequences Oenebank,the were98．5％and with