肝素黄杆菌肝素酶Ⅲ基因hepC的可溶表达体系构建及其酶学性质的研究.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2013 6 肝素黄杆菌肝素酶 Ⅲ基因 hepC 的可溶表达体系构建及 酶学性质研究 1，2 2 2 2 翀2 2 李晔   吴敬君  叶逢春  苏楠  张   邢新会 （1. 北京电子科技职业学院，北京 100029 ；2. 清华大学化学工程系生物化工研究所，北京 100084） 摘 要 ： 肝素酶III （HepC ）是肝素结构分析及酶法制备低分子量肝素的重要生物催化剂。为实现HepC 在大肠杆菌中的可 溶表达，通过PCR 方法从肝素黄杆菌 （ ）的基因组中扩增得到HepC 基因，采用融合蛋白方法构建了麦芽 Flavobacterium heparinum 糖结合蛋白（MBP ）与HepC 融合的表达载体和体系，并在低温 （15 ℃ ）下诱导重组大肠杆菌，显著提高了MBP-HepC 重组表达 的可溶性。通过摇瓶培养发酵液的HepC 比酶活达到46.4 1 IU/mg ，超过目前报道的最高水平。通过MBP 与直链淀粉的亲和吸附实 现了MBP-HepC 的亲和分离和纯化，一步亲和纯化后蛋白的纯度即可达95% 以上。该融合酶基本特性研究表明，融合肝素酶III （MBP-HepC ）的最适作用pH7.3 ，最适作用温度为42 ℃-48 ℃。热稳定性较好，其30 ℃时的稳定性高于融合肝素酶I （MBP-HepA ）。 关键词 ： 肝素酶III 麦芽糖结合蛋白 重组表达 纯化 酶学性质 Clonging and Expression of Heparinase III Gene from Flavobacterium heparinum and Characterization of the Recombinant Fusion Enzyme 1，2 2 2 2 2 2 Li Ye Wu Jingjun Ye Fengchun Su Nan Zhang Chong Xing Xinhui （1. Beij ing Polytechnic ，Beij ing 100029 ；2. Institute of Biochemical Engineering ，Dep artment of Chemical Engineering ， Tsinghua University ，Beij ing 100084 ） Abstract:  Heparinase III is an important enzyme for heparin structure analysis and low molecular weight heparin production. To achieve the soluble expressio