哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因克隆及其原核表达.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 6 :183-188 哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因克隆及原核表达 1，2，3 燏1，2，3 1，2，3 1，2，3 2，3，4 朱帆   丁   鲁义善   简纪常   吴灶和 （1. 广东海洋大学水产学院，湛江 524088 ；2. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，湛江 524088 ；3. 广东省教育厅水产 经济动物病害控制重点实验室，湛江 524088 ；4. 仲恺农业工程学院，广州 510225） 摘 要 ： 经克隆哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶（GR）基因，并构建其原核表达载体，以获得相应的表达蛋白。将GR 和pET-32a（+） 通过 H I 和 I 双酶切后，体外用T4 连接酶连接，构建重组质粒pET-GR；然后转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，利用异丙基-β-D- Bam Xho 硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，应用SDS分析表达情况和表达条件。SDS电泳获得分子量约为68.9 kD 融合蛋白条带。 在E.coli BL21（DE3） 中重组质粒pET-GR 的表达条件为28℃，0.7 mmol/L 的IPTG 浓度诱导4 h 表达量最高，且主要以包涵体形 式表达。哈氏弧菌谷胱甘肽还原酶基因在大肠杆菌中获得了高效表达。 关键词 ： 哈氏弧菌 ；谷胱甘肽还原酶 ；基因克隆 ；原核表达 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.06.029 Cloning and Prokaryotic Expression of Glutathione Reductase Gene in Vibrio harveyi Zhu Fan1，2，3 Ding Yu1，2，3 Lu Yishan1，2，3 Jian Jichang1，2，3 Wu Zaohe2，3，4 （1. Fisheries College ，Guangdong Ocean University ，Zhanjiang 524088 ；2. Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals ，Zhanjiang 524088 ；3. Key Laboratory of Diseases Controlling for Aquatic Economic Animals of Guangdong Higher Education Institutions ，Zhanjiang 524088 ；4. Zhongkai University of Agriculture and Engineering ，Guangzhou 510225 ） Abstract: The purpose of this study is to clone glutathione reductase（GR）gene from Vibrio harveyi, construct the prokaryotic expression vector of it, and obtain the corresponding expressed protein. Digested GR and pET-32a（+）were cut with the double enzymes BamH I and Xho I, then