红树林土壤微生物宏基因组文库的构建及其两种新颖的β-葡萄糖苷酶基因的鉴定.pdfVIP

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2016-05-12 发布于安徽
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红树林土壤微生物宏基因组文库的构建及其两种新颖的β-葡萄糖苷酶基因的鉴定.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第期 2014 6 红树林土壤微生物宏基因组文库的构建及两种新颖的 β-葡萄糖苷酶基因的鉴定麦志茂苏宏飞李丽珍张偲（中国科学院南海海洋研究所中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室，广州 510301）摘要：宏基因组技术是挖掘微生物新酶的重要途径。通过构建红树林土壤微生物Fosmid 文库，共获得了约100 000 个阳性克隆，该文库外源插入片段平均长度约为30 kb ，文库容量达3 Gb 。通过对文库中10 000 个克隆进行功能筛选，获得了17 个具有β-葡萄糖苷酶活性的克隆。对其中2 个表达β-葡萄糖苷酶的克隆进行亚克隆，获得2 个新颖的β-葡萄糖苷酶的基因，分别命名和。生物信息学分析表明，基因由1 992 个碱基对组成，基因由2 025 个碱基对组成。在氨基酸水平上， MhGH3 bgl66 MhGH3 bgl66 MhGH3 和bgl66 编码的蛋白质与GenBank 数据库中已知β-葡萄糖苷酶的一致性分别为64% 和55%。关键词： β-葡萄糖苷酶纤维素酶红树林宏基因组文库 Construction of a Mangrove Soil Metagenome Library and Identification of Two Novel β-Glucosidase Genes Mai Zhimao Su Hongfei Li Lizhen Zhang Si - （Key Laboratory of Marine Bio resources Sustainable Utilization ，South China Sea Institute of Oceanology ，Chinese Academy of Sciences ， Guangzhou 51030 1 ） Abstract: Metagenomics provides a means of exploring new enzymes in microorganisms. A mangrove soil metagenome library with 100 000 clones was constructed. The average length of inserted DNA fragment is about 30 kb, and the total capacity of inserted DNA reached about 3 Gb. Seventeen clones with β-glucosidase activity were detected by screening 10 000 fosmid clones. The subcloning and sequencing revealed two novel β-glucosidase genes （ and ）. Bioinformatics analysis indicated that and composed of 1 992 bp MhGH3